抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用

抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用 (ADCP) 是一種免疫消除機(jī)制，其憑借單克隆抗體 (mAb) 靶向腫瘤細(xì)胞，以促進(jìn)吞噬免疫細(xì)胞將腫瘤細(xì)胞從體內(nèi)清除。這使得腫瘤細(xì)胞特異性 mAb 成為一種有吸引力的抗癌治療的候選藥物，并且?guī)追N療法已經(jīng)獲得批準(zhǔn)（例如曲妥珠單抗，它是治療 Her-2 陽(yáng)性乳腺癌的常用藥物）。

這些療法的作用機(jī)制 (MoA) 既依賴(lài)于它們結(jié)合巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞上的 Fc 受體 (FcR) 的能力，也依賴(lài)于它們與腫瘤細(xì)胞上過(guò)表達(dá)的抗原的特異性結(jié)合。在抗體開(kāi)發(fā)過(guò)程中，通過(guò)體外分析表征分子誘導(dǎo)各種 MoA（包括 ADCP）的能力至關(guān)重要，以指示其治療潛力。測(cè)定 ADCP 的傳統(tǒng)技術(shù)通常：

使用采集通量較低的儀器，需要大體積的樣品（例如，傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀）
費(fèi)力費(fèi)時(shí)，需要優(yōu)化方案、固定和反復(fù)洗滌等步驟
僅提供定性讀數(shù)或需要手動(dòng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析
測(cè)量誤差較多，而非定量真實(shí)的 ADCP 信號(hào)
依賴(lài)表達(dá)基因工程報(bào)告基因的細(xì)胞系

iQue^? 的 ADCP 利用 iQue^? 人抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用試劑盒，通過(guò)精簡(jiǎn)的工作流程對(duì)活靶細(xì)胞與 CD14+ 原代效應(yīng)細(xì)胞的共定位進(jìn)行定量，實(shí)現(xiàn) ADCP 的高通量測(cè)定。利用 iQue^? 高通量流式細(xì)胞儀的強(qiáng)大功能與自動(dòng)化集成分析，獲得靶向測(cè)試抗體對(duì) ADCP 影響的瞬時(shí)藥理學(xué)數(shù)據(jù)。

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概念

圖 1. iQue^? 人抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用試劑盒分析原理示意圖。

在 96 孔板或 384 孔板中，將 iQue^? 增殖和編碼（B/綠色）染料標(biāo)記的靶細(xì)胞與測(cè)試抗體共孵育，然后加入未標(biāo)記的效應(yīng)細(xì)胞（PBMC 或富集的單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞群）。

使用 iQue^? 細(xì)胞膜完整性（R/紅色）染料分離活細(xì)胞與死細(xì)胞。將根據(jù)靶細(xì)胞編碼器呈陽(yáng)性的活的 CD14+ 效應(yīng)細(xì)胞的百分比對(duì) ADCP 進(jìn)行定量。

該試劑盒中使用的熒光團(tuán)組合意味著它與 iQue^? BR 和 VBR 配置兼容。

獲得定量數(shù)據(jù)

生成適用于藥理學(xué)分析的可重現(xiàn)、特異性的 ADCP 測(cè)定值。

圖 2.使用 ForeCyte^? 進(jìn)行高效數(shù)據(jù)分析，可自動(dòng)計(jì)算 EC₅₀，獲得藥物效價(jià)排序

將 B/Green 標(biāo)記的 Ramos 細(xì)胞（2500 個(gè)細(xì)胞/孔）與 PBMC（效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比為 20:1）一起接種到 96 孔板中。用一系列不同的利妥昔單抗 mAb 亞型刺激 ADCP，這些亞型包括：IgG1、IgG1NQ（非糖基化）、IgG2 和 IgG4。使用 iQue^? 抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用試劑盒標(biāo)記細(xì)胞，并使用 iQue^? 3 對(duì) ADCP 進(jìn)行分析。ADCP (%) 是指活細(xì)胞群中 CD14 和 B/Green 編碼 + 細(xì)胞的百分比。

1.Invivogen：用于細(xì)胞生物學(xué)研究的試劑和工具。

實(shí)現(xiàn)高通量分析

在 96 孔或 384 孔板中使用經(jīng)驗(yàn)證的試劑快速定量 ADCP，促進(jìn)您的發(fā)現(xiàn)。

圖 3.在單個(gè) 384 孔板中，分析在多種效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比條件下來(lái)自多例供體的 PBMC 的 ADCP 效應(yīng)。

將非貼壁的 Ramos 靶細(xì)胞（2500 個(gè)細(xì)胞/孔）與 Truxima (CD20-IgG1) 和 PBMC 以 5:1、10:1 和 20:1 的效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比共孵育。利用不含抗體的孔作為陰性對(duì)照。使用 iQue^? 人抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用試劑盒和 iQue^? 3 對(duì) ADCP 進(jìn)行評(píng)估。

(A) 為 ADCP (%) 熱圖；(B) 和 (C) 分別為來(lái)自供體 1 和 2 的 PBMC 的 ADCP (%) 濃度響應(yīng)曲線(xiàn)。

分析生理相關(guān)的細(xì)胞模型

利用原代效應(yīng)細(xì)胞對(duì)各種貼壁或非貼壁靶細(xì)胞的 ADCP 進(jìn)行評(píng)估。

圖 4.使用靈活的共培養(yǎng)模型區(qū)分治療藥物對(duì)貼壁靶細(xì)胞的吞噬作用。

將 B/Green 編碼的貼壁 AU565 細(xì)胞（10000 個(gè)細(xì)胞/孔）與曲妥珠單抗 (Her2-IgG1 mAb) 和分離的單核細(xì)胞（效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比為 5:1）共孵育。使用 iQue^? 人抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用試劑盒標(biāo)記細(xì)胞，并使用 iQue^? 3 進(jìn)行分析。

(A) ForeCyte^? 直方圖的樣品板視圖，顯示了 ADCP 事件（CD14+ B/Green+ 活細(xì)胞）隨曲妥珠單抗?jié)舛鹊脑黾佣黾印?/p>

(B) 與對(duì)照抗體 (BGal-IgG1) 相比，曲妥珠單抗處理后 ADCP (%) 增加。

最大程度地提高分析效率

通過(guò)實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)分析和新穎的可視化工具，縮短獲得結(jié)果的時(shí)間

圖 5a.利用 iQue^? 采集樣品時(shí)，將自動(dòng)填充預(yù)設(shè)的圈門(mén)模板。

將 iQue^? 人抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用試劑盒隨附的模板導(dǎo)入 iQue^? ForeCyte^?，以提供與 CD14+ 單核細(xì)胞共定位的 B/綠色編碼靶細(xì)胞的即時(shí)定量結(jié)果。與簡(jiǎn)單的 3 步圈門(mén)策略結(jié)合的單個(gè)細(xì)胞門(mén)，可確保測(cè)定真實(shí)的 ADCP 信號(hào)。

圖 5b.利用 iQue^? ForeCyte^? 軟件進(jìn)行自動(dòng)化數(shù)據(jù)分析，可提供即時(shí)的 ADCP 讀數(shù)。

應(yīng)用圈門(mén)模板后，可使用簡(jiǎn)便易用的 iQue^? ForeCyte^? 分析平臺(tái)進(jìn)行藥理學(xué)分析，同時(shí)以簡(jiǎn)單、清晰的格式顯示結(jié)果。數(shù)據(jù)可視化的示例包括：

(A) 輪廓線(xiàn)圖，包含 CD14 陽(yáng)性細(xì)胞群的清晰圈門(mén)；(B) 包含 Ramos 或 Raji 靶細(xì)胞的 PBMC 對(duì) Truxima 的 ADCP (%) 響應(yīng)熱圖；(C) 來(lái)自 (B) 的數(shù)據(jù)，以濃度響應(yīng)曲線(xiàn)表示。對(duì)于 Ramos 和 Raji，從 iQue^? ForeCyte^? 直接導(dǎo)出的 EC50 值分別為 29.1 ng/mL 和 24.8 ng/mL。