可固定活力染料
在評估細(xì)胞的治療應(yīng)答時，為了將死細(xì)胞排除在最終數(shù)據(jù)分析之外，確定細(xì)胞活力十分重要。當(dāng)通過流式細(xì)胞術(shù)進行細(xì)胞內(nèi)免疫分型時，采用可固定活力染料染色并在固定后依然可以保持染色圖案，對于正確識別細(xì)胞群至關(guān)重要。目前有許多固定活力染色法可用于量化細(xì)胞活力，但是這些方法與固定方案不兼容，最終可能導(dǎo)致在數(shù)據(jù)集中出現(xiàn)偽影。
借助 iQue? 可固定活力染料，用戶可以通過從細(xì)胞標(biāo)記到分析的簡化工作流程，在使用 96 孔板進行固定和/或透化后對樣品中的細(xì)胞活力進行準(zhǔn)確的評估。通過細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞術(shù)工作流程獲得準(zhǔn)確細(xì)胞活力信息從此易如反掌！
應(yīng)用
檢測原理
iQue? 可固定活力染料是一種區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞的氨基活性不透膜染料。染色的細(xì)胞可以固定和透化，使染料與下游細(xì)胞內(nèi)染色相容，并且強度不會有任何減弱。
經(jīng)過驗證，iQue? 可固定活力分析試劑盒可在 iQue? 平臺上使用 BR 和 VBR 配置運行。用戶可以使用從細(xì)胞標(biāo)記到分析的簡化工作流程，對細(xì)胞活力、細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)靶點進行定量分析。iQue? 可固定活力分析試劑盒有三種不同顏色可供選擇，可以滿足流式多色 Panel 的需求。為便于使用，分析試劑盒中包含了用于設(shè)門策略和分析的預(yù)置模板。
基本工作流程：
- 使用不含蛋白的 PBS 清洗細(xì)胞
- 使用在不含蛋白的 PBS 中稀釋的染料對細(xì)胞染色 20-30 分鐘
- 如果需要，執(zhí)行下游染色方案（表面標(biāo)志物染色、固定/透化、細(xì)胞內(nèi)染色）
- 在 iQue? 平臺（采用 BR 和 VBR 配置）上分析樣品板
關(guān)鍵優(yōu)勢
固定后保留染色?- 在固定或透化后保持熒光染色強度，從而區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞
對細(xì)胞內(nèi)靶點進行無偽影分析?- 監(jiān)測表面和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志物的表達，同時減少來自死亡細(xì)胞的偽影
節(jié)省寶貴的樣品?- 節(jié)省樣品，只需要 20 μL 細(xì)胞即可完成多項下游檢測
固定后保留染色
在固定或透化后沒有任何染色強度損失，可保留熒光性能以區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。
圖 1.在經(jīng)過固定/透化的細(xì)胞和非固定細(xì)胞中使用 iQue? 可固定活力染料進行熒光染色的對比圖。
用 iQue? 可固定 V/藍色 (A)、B/綠色 (B) 或 R/紅色 (C) 染料對存活的和經(jīng)過熱處理（65°C，10 分鐘）的 Jurkat 死亡細(xì)胞的混合物進行染色。染色后的細(xì)胞使用 3.7% 的甲醛和 0.1% 的皂苷 PBS 溶液進行固定和透化，其中部分未被固定。用戶可使用 iQue? 儀器采集所有樣品的數(shù)據(jù)，并使用分析試劑盒中包含的預(yù)置模板導(dǎo)出門內(nèi)單細(xì)胞的柱狀圖。
實現(xiàn)無偽影的細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)分析
最大限度地減少死亡細(xì)胞產(chǎn)生的潛在偽影，同時分析細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志物的表達。
圖 2.iQue? 可固定活力染料染色的 PBMC 的細(xì)胞內(nèi) IFN-γ 表達檢測和分析實例。
將 PBMC 在 CD3 抗體包被樣品板（含有 10 ng/mL 人重組 IL-2）中培養(yǎng)兩天。測定前 4 小時，將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運抑制劑莫能菌素 (2 μM) 添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中。向 96 孔檢測板的每個孔中加入已活化的 PBMC (20 μL)，用 iQue? 可固定活力（V/藍色）染料染色，然后用 T 細(xì)胞表面標(biāo)志物 CD3 染色。接下來將細(xì)胞固定并用 Cytofix/Cytoperm 溶液 (BD Biosciences) 透化，再用 PE 偶聯(lián)的小鼠抗人 IFN-γ 抗體染色。樣品采集和數(shù)據(jù)分析分別使用 iQue? 儀器和 Forecyt 軟件。A，所有細(xì)胞的設(shè)門。B，單細(xì)胞的設(shè)門。C，用 iQue? 可固定活力（V/藍色）染料染色排除死細(xì)胞。D，CD3+ 活細(xì)胞中的 IFN-γ 表達圖示。
節(jié)省寶貴的樣品
節(jié)省樣品，僅需 20 μL 細(xì)胞即可完成多個下游分析。
圖 3.易于遵循的小樣品量（20 μL/孔）方案可節(jié)省細(xì)胞并縮短設(shè)置時間
訂購信息
| 平臺：兼容 iQue? 3/iQue? Screener Plus - VBR 和 BR 配置 | |||
| 產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品目錄號 | |
| iQue? 可固定活力（V/藍色）分析試劑盒 | 5 x 96 孔 | BA-97116 | |
| iQue? 可固定活力（B/綠色）分析試劑盒 | 5 x 96 孔 | BA-97119 | |
| iQue? 可固定活力（R/紅色）分析試劑盒 | 5 x 96 孔 | BA-97122 | |
