Incucyte? - iQue? 工作流程
為了更好地模擬體內(nèi)研究,體外細(xì)胞生物學(xué)模型變得越來越復(fù)雜。然而,從復(fù)雜生物相互作用中獲得的結(jié)果也越來越難以解讀,對此,還需要進(jìn)行更深入的了解。用戶需要通過綜合性專業(yè)技術(shù)來進(jìn)行更詳細(xì)的分析,從而更深入地研究生物學(xué)特征并得出更具生理相關(guān)性的結(jié)論。為此,必須開發(fā)可更輕松地關(guān)聯(lián)技術(shù)平臺并且有效利用時間和樣品的工作流程。
應(yīng)用
Incucyte? - iQue? 工作流程
Incucyte - iQue 工作流程通過免疫細(xì)胞殺傷應(yīng)用描述如何使用單個檢測板獲取實(shí)時相互作用、每日細(xì)胞因子濃度和 T 細(xì)胞活化特征信息。
- 將表達(dá)?Incucyte? Nuclight 綠色慢病毒(EF1a、Bleo) 的貼壁或非貼壁靶細(xì)胞與免疫細(xì)胞(無標(biāo)記)進(jìn)行共培養(yǎng)。
- 使用 Incucyte? 監(jiān)測腫瘤細(xì)胞增殖和死亡。根據(jù) NucGreen 熒光靶細(xì)胞計數(shù)和培養(yǎng)物中的 Annexin V 添加量進(jìn)行監(jiān)測。
- 通過從檢測板采樣并使用 Qbeads (捕獲微球和檢測抗體),可以在整個實(shí)驗(yàn)過程中監(jiān)測每日細(xì)胞因子濃度。
- Incucyte? 自動圖像分析可實(shí)現(xiàn)有選擇性地對腫瘤細(xì)胞死亡 (Basic Analyzer) 以及 PBMC 增殖和形狀變化 (Cell-by-Cell) 進(jìn)行定量分析。
- 將細(xì)胞分離后(按照 Incucyte? - iQue? 工作流程方案),使用?iQue? 人 T 細(xì)胞活化分析試劑盒進(jìn)行標(biāo)記?。
- 然后,根據(jù)預(yù)定義的設(shè)門策略定量分析 T 細(xì)胞亞群和活化特征。
關(guān)鍵優(yōu)勢
執(zhí)行細(xì)胞因子動力學(xué)測定?時,?可以在無干擾情況下采集少量上清液樣品,最大程度地提高樣品使用率并減少操作。
易于使用的即混即讀式檢測試劑盒?,采用 iQue? - Incucyte? 兼容試劑。
?將亞群和細(xì)胞因子分析?與空間和形態(tài)定量分析相結(jié)合。
可提供更多生物學(xué)信息?,使您更深入地了解生理學(xué)。
執(zhí)行細(xì)胞因子動力學(xué)測定時,可以在無干擾情況下采集少量上清液樣品,最大程度地提高樣品使用率并減少操作
可以對整個腫瘤細(xì)胞殺傷過程(> 5 天)進(jìn)行監(jiān)測,并可在無干擾情況下采集上清液樣品,用于測定細(xì)胞因子濃度。
圖 1.可以通過結(jié)合使用多種技術(shù)了解事件發(fā)生的先后順序。
在共培養(yǎng)免疫細(xì)胞殺傷分析中觀察到 CD3/CD28 Dynabead 活化的影響。將 SKOV-3 細(xì)胞以 4,000 個細(xì)胞/孔的密度接種,等待 4 小時,使其貼壁。然后,將系列稀釋的 Dynabead 添加到孔中,然后再以 10,000 個細(xì)胞/孔的密度添加 PBMC。每天采集上清液樣品 (10 μL),用于細(xì)胞因子分析。
時間數(shù)據(jù)顯示了事件發(fā)生的時間表,從中可以發(fā)現(xiàn),首先觀察到細(xì)胞因子分泌增加(A、B),然后效應(yīng)細(xì)胞增殖增加 (C),這導(dǎo)致靶細(xì)胞數(shù)量減少 (D)。這是在 120 小時內(nèi)收集的數(shù)據(jù)。每個數(shù)據(jù)點(diǎn)代表平均值 ± SEM,n = 3。
將亞群分析與空間和形態(tài)定量分析相結(jié)合
- 自動進(jìn)行 T 細(xì)胞亞群的表型分析和分泌細(xì)胞因子的定量分析
- 實(shí)時觀察和定量分析靶細(xì)胞群和效應(yīng)細(xì)胞群的表型變化
圖 3a. 各平臺之間的靶細(xì)胞分析具有可比性。
(A) 相差/熒光圖像顯示了 SKOV-3 Nuclight 綠色試劑轉(zhuǎn)染的卵巢癌細(xì)胞(靶細(xì)胞)與未標(biāo)記的 PBMC(效應(yīng)細(xì)胞)的共培養(yǎng)物。
(B) Incucyte? 軟件可以直接基于圖像檢測及定量分析靶細(xì)胞(有粉色外沿的綠色對象),從而確定靶細(xì)胞數(shù)量。
(C) ?2D 密度圖 iQue? 分析結(jié)果表明了如何從陰性 PBMC 細(xì)胞群中分離出具有綠色標(biāo)記的靶細(xì)胞。
(D) 靶細(xì)胞頻率。
可提供更多生物學(xué)信息,使您更深入地了解生理學(xué)
通過結(jié)合使用多種技術(shù),可以更深入地了解生物學(xué)。
圖 4.僅通過一次檢測即可定量分析抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、細(xì)胞相互作用的變化和 T 細(xì)胞活化。
在非貼壁靶細(xì)胞和 PBMC 的共培養(yǎng)中觀察到抗 hCD3xCD19 BiTE 抗體活化的影響。以 15,000 個細(xì)胞/孔的密度接種 Ramos 細(xì)胞(綠色)。先將 BiTE 抗體添加到孔中,然后再添加 PBMC(75,000 個細(xì)胞/孔)。
(A)?熒光強(qiáng)度測定結(jié)果的減弱表明,BiTE 抗體誘導(dǎo)殺傷 Ramos 細(xì)胞,且呈濃度依賴性。
(B) 細(xì)胞聚集也增加并呈濃度依賴性,這是免疫細(xì)胞殺傷的標(biāo)志。將 BiTE 刺激與 Dynabead 刺激進(jìn)行比較時,觀察到 T 細(xì)胞活化標(biāo)志物有所差異
(C, D)?在圖像中觀察到形態(tài)變化
(E, F) 可執(zhí)行定性鑒定。這是在 72 小時內(nèi)收集的數(shù)據(jù)。每個數(shù)據(jù)點(diǎn)代表平均值 ± SEM,n = 3。
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5 x 96 孔 | 90561 | |
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Incucyte? Nuclight 綠色慢病毒試劑 | ||
現(xiàn)有規(guī)格 | 產(chǎn)品目錄號 | |
0.2mL; 1x106 TU/mL | 4475 或 4626 |