支持在生理相關模型中研究 NK 細胞介導的腫瘤細胞殺傷作用。

圖 2.在共培養(yǎng)分析中定量自然殺傷細胞介導的抗體依賴性細胞毒性、細胞因子/蛋白釋放和標志物表達。編碼的 Raji 腫瘤細胞（2 × 10⁴ 個/孔）與來自兩個單獨供體的 PBMCs（2 × 10⁵ 個/孔）共培養(yǎng)。PBMCs 分別與以下三個抗 CD20 抗體之一共同孵育：Ab-1 (IgG1)、Ab-2 (IgG1) 或陰性對照 Ab-3 (IgA2)。濃度范圍在 10 μg/mL - 0.128 ng/mL 之間。

4 小時后，使用人 NK 細胞殺傷分析試劑盒和 iQue^? 3 分析 10 μL 樣品，以評估腫瘤細胞殺傷情況，同時還使用 iQue^? 人 NK 細胞配套試劑盒測定了顆粒酶 A。

(A,B) 來自兩個供體的靶細胞殺傷對抗體的響應不同。(C,D) 兩個供體細胞顆粒酶 A 的產生都呈現出濃度和供體依賴性。(E,F) 自然殺傷細胞的 CD16+ 表達隨著刺激的增加而降低。

圖 3.通過細胞因子刺激的 NK 介導的直接腫瘤細胞殺傷也可以進行定量。將編碼的 K562 腫瘤細胞（2×104 個/孔）與富集的（陰性選擇）人 NK 細胞共培養(yǎng)，人 NK 細胞已在單獨培養(yǎng)基（非活化 NK 細胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 細胞）的培養(yǎng)基中孵育 16-18 小時，效靶比為 5:1。 在 4 小時和 24 小時后，使用 iQue^? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒和 iQue^? 3 對 10 μL 樣品進行分析，以評估腫瘤細胞的殺傷作用。

(A) 直方圖顯示了靶細胞在與非活化或細胞因子激活的 NK 細胞共培養(yǎng) 4 小時后的活性。(B,C) 圖中匯總了在與非活化或細胞因子激活的 NK 細胞共培養(yǎng) (B) 4 小時或 (C) 24 小時后死亡腫瘤細胞的百分比。

在細胞和微球混合分析中同時測定效應細胞標記物的表達和分泌效應蛋白的含量。

圖 4.使用細胞表型分析和細胞因子分泌分析檢測 NK 活化的不同狀態(tài)。將編碼的 K562 腫瘤細胞（2×10⁴ 個/孔）與富集的（陰性選擇）人 NK 細胞共培養(yǎng)，人 NK 細胞已在單獨培養(yǎng)基（非活化 NK 細胞），或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15（已活化 NK 細胞）的培養(yǎng)基中孵育 16-18 小時，效靶比為 1:1 或 5:1。在共培養(yǎng) 24 小時后，取出 10 μL 樣品，使用 iQue^? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒和 iQue^? 3 進行分析。

(A) 活化標志物（CD69 和 CD25）的表達情況。(B) IFNg 的產生和顆粒酶 B 的分泌情況。 (C) 將 iQue^? 人 NK 細胞配套試劑盒和 iQue^? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒相結合，對其他額外的細胞因子進行平行評估。 NK = 自然殺傷細胞。T = K562 腫瘤靶細胞。

IL-2 和 IL-15 活化后，多種效應蛋白（如顆粒酶 B 和 CCL5 (RANTES)）的表達和分泌增加。這些作用在靶細胞和 NK 細胞共培養(yǎng)時進一步增強。

實時的數據分析和創(chuàng)新的可視化工具可實現快速的數據采集。

圖 5.iQue^? ForeCyt^? 上的預先設門和多種分析功能可實現人 NK 細胞的自動表型分析。

(A) 使用陽性和陰性孔在未活化的 NK 細胞（陰性；紅色）vs. 細胞因子活化的 NK 細胞（陽性；綠色）上創(chuàng)建 CD69 表達的疊加圖示例。(B) 顯示每個孔中 CD69+ 細胞百分比的微孔板熱圖示例。(C) 描述 NK 細胞上 CD69 表達的疊加直方圖示例。 （Non-act.NK = 未活化的 NK 細胞，Act.NK = 細胞因子活化的 NK 細胞，T = 靶標癌細胞）。

將傳統工作流程壓縮并簡化為微量化取樣的單個小型化多重分析。

圖 6. 使用清晰易懂的方案，分析 NK 細胞介導的腫瘤細胞殺傷作用，同時使用 iQue^? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒評估 NK 細胞的活化狀態(tài)和細胞因子的釋放。