通過可重現(xiàn)、清晰易懂的方案評價 T 細胞對實體瘤的應答，以溫和的方式分離腫瘤球

圖 1b. ?檢測工作流程—使用 iQue^? 分析 T 細胞的腫瘤球殺傷檢測方案。

利用先進的 3D 細胞模型在腫瘤細胞殺傷過程中分析 T 細胞表型和功能

圖 2a.使用 iQue^? 高通量流式細胞儀定量檢測腫瘤球 T 細胞殺傷過程中的細胞亞群和細胞因子釋放
將使用 Incucyte^? Nuclight 標記為綠色的 MDA-MB-231 細胞（2,500/孔）接種到含有 2.5% Matrigel^? 的 ULA 板中，孵育 72 小時，促進腫瘤球形成。以 5:1 的效應細胞/靶細胞比 (E:T) 加入未標記的 PBMC，并使用 ImmunoCult? 人 CD3/CD28/CD2 T 細胞活化因子對其誘導活化。在第 1 天、第 3 天和第 7 天，對接種相同細胞的孔板進行分離，并使用 iQue^? 人 T 細胞殺傷分析試劑盒分析 T 細胞表型。(A) 在 Immunocult 最高濃度下，從第 1 天到第 7 天，靶細胞活力逐漸下降。(B) 從第 1 天到第 3 天，T 細胞活化標志物和 (C) 耗竭標志物表達升高，然后在第 7 天開始下降。(D) 釋放的顆粒酶 B（一種直接參與誘導 T 細胞介導腫瘤細胞死亡的蛋白酶）隨著 Immunocult 濃度的升高而增加。

圖 2b.采集少量上清液樣品研究 T 細胞功能隨時間的變化和進行細胞因子動態(tài)分析
在BT474（2,500/孔）腫瘤球形成 72 小時后，添加 PBMC（12,500/孔）和 CD3/CD28 Dynabead。在第 1 天、第 4 天和第 8 天采集上清液樣品 (10 μL)，并使用 iQue^? Qbeads^? 分析細胞因子濃度。提示 T 細胞活化的細胞因子（IFNγ 和 TNFα）的濃度隨著時間以及 Dynabead 密度的增加而升高。 此外，顆粒酶 B（直接參與細胞毒性淋巴細胞殺傷靶細胞的蛋白酶）的釋放也有所增加。IL-10（一種與記憶 T 細胞形成頻率有關(guān)的細胞因子）的產(chǎn)生量持續(xù)增加至第 4 天，然后在第 8 天開始減少。

快速采樣從而增加復制，可實現(xiàn)多試劑盒分析以及高通量定量檢測

圖 3.分析用時短，可以使用多個 T 細胞表征檢測試劑盒更好地進行廣泛的表型分析
在使用 Incucyte^? Nuclight 標記為綠色的 BT474（2,500/孔）腫瘤球形成 72 小時后，添加 PBMC（12,500/孔）和 CD3/CD28 Dynabead。在第 1 天、第 4 天和第 8 天，使用 iQue^? 人 T 細胞活化、殺傷和耗竭分析試劑盒分析來自復制孔板的細胞。(A) CD3+ 活細胞群中 CD25+ 細胞的孔板視圖。(B) 靶細胞活力隨著時間的推移而降低。(C) 早期活化標志物 CD69 的表達在第 1 天增加，然后在第 4 天減少。(D) 后期活化標志物 CD25 的表達在第 4 天和第 8 天增加。(E) PD-1（T 細胞耗竭的早期指標）的表達在第 4 天最高。

快速采樣從而增加復制，可實現(xiàn)多試劑盒分析以及高通量定量檢測

圖 4.使用iQue^? Forecyt^? 中預先設(shè)定的設(shè)門模板，實現(xiàn) T 細胞亞群自動分型將 BT474 腫瘤球（2,500/孔）與 PBMC（效應細胞/靶細胞比 (E:T) 為 5:1）共孵育，然后使用 CD3/CD28 Dynabead 誘導活化。在第 24 小時，使用 iQue^? 人 T 細胞記憶分析試劑盒進行分析。(A) 使用試劑盒中的模板對 Tscm（干細胞記憶 T 細胞）和 Tte（末端效應 T 細胞）設(shè)門的圖。在直接從 iQue^? Forecyt^? 軟件導出的 (B) 熱圖和 (C) 濃度響應曲線中，明顯可以看出隨著 Dynabead 濃度的增加從早期 Tscm（干細胞記憶 T 細胞）表型到后期 Tte（末端效應 T 細胞）表型的變化。這種變化還伴隨著 T 細胞自我更新能力喪失。