記憶 T 細(xì)胞 - 細(xì)胞和細(xì)胞因子分析

用于免疫細(xì)胞功能的記憶 T 細(xì)胞

在初次感染期間，獲得性免疫系統(tǒng)通過識別相應(yīng)的效應(yīng) T 細(xì)胞來做出應(yīng)答，細(xì)胞擴(kuò)增并轉(zhuǎn)化出多種功能，以應(yīng)對特定的免疫挑戰(zhàn)。感染清除后，大部分適應(yīng)性 T 細(xì)胞執(zhí)行程序性死亡（凋亡），而一系列異質(zhì)性的記憶 T 細(xì)胞則會保留下來。這些細(xì)胞為抗原特異性 T 細(xì)胞，會在感染被清除后長期保留。記憶 T 細(xì)胞再次暴露于相同的抗原時，會快速分化為大量的效應(yīng)細(xì)胞，對此前出現(xiàn)過的感染做出快速應(yīng)答。

疫苗和過繼性細(xì)胞轉(zhuǎn)化免疫治療方案都會受記憶 T 細(xì)胞異質(zhì)性的影響，能夠使用單個方法鑒別這些功能不同的記憶 T 細(xì)胞亞群對于免疫治療具有重要意義。T 細(xì)胞記憶表型和細(xì)胞因子釋放的傳統(tǒng)檢測方法通常：

需要分開進(jìn)行細(xì)胞因子（例如 ELISA）和標(biāo)志物表達(dá)分析（例如傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)）
使用低通量采集和需要大樣本量的儀器
需要人工分析并從多個來源匯總數(shù)據(jù)
工作流程冗長、耗時；需要諸如方案優(yōu)化、固定和反復(fù)清洗的步驟

iQue^? 人 T 細(xì)胞記憶分析應(yīng)用，采用 iQue^? 人 T 細(xì)胞記憶分析試劑盒進(jìn)行同時、高通量的 T 細(xì)胞記憶表型以及分泌的效應(yīng)蛋白和細(xì)胞因子分析，結(jié)合 iQue^? 高通量流式細(xì)胞儀的強(qiáng)大功能和集成式 iQue^? ForeCyt^? 軟件的實時數(shù)據(jù)分析，可為您提供簡化的記憶 T 細(xì)胞集群定量解決方案，可應(yīng)用于腫瘤免疫學(xué)療法的開發(fā)和研究。

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檢測原理

圖 1. iQue^? 人 T 細(xì)胞記憶分析試劑盒的分析原理示意圖。

通過 CD3、CD4 和 CD8 標(biāo)志物的染色檢測 T 細(xì)胞的基本表型。通過 CD45RA、CD45RO、CD27、CD62L 和 CD95 標(biāo)志物的染色檢測 T 細(xì)胞活化后不同分化階段的 T 細(xì)胞亞型（TN、TSCM、TCM、TTM、TEM、TEMRA 和 TTE）。在同一個孔中，還可以通過夾心法免疫分析，使用 Qbeads 定量分泌的促炎細(xì)胞因子 IFNγ 和抗炎細(xì)胞因子 IL-10。使用膜完整性熒光染料進(jìn)行染色，區(qū)分活免疫細(xì)胞與死細(xì)胞。

關(guān)鍵優(yōu)勢

洞察生物學(xué)結(jié)果 - 通過生理相關(guān)的模型研究 T 細(xì)胞記憶表型
提高分析效率 - 在細(xì)胞和微球混合分析中同時測定細(xì)胞標(biāo)志物和分泌的細(xì)胞因子
簡化數(shù)據(jù)分析 - 實時數(shù)據(jù)分析和創(chuàng)新的可視化工具，支持快速生成定量讀數(shù)
節(jié)省時間和寶貴的樣本 - 將傳統(tǒng)工作流程壓縮為單個小型化的多重分析

洞察生物學(xué)結(jié)果

圖 2.細(xì)胞因子的刺激可以使具有高度自我更新能力的記憶細(xì)胞維持 5 天以上。

將 PBMCs（100 K/孔）接種，進(jìn)行單一培養(yǎng)，加入“核心”細(xì)胞因子（IL-4，100 ng/mL 和 IL-7，10 ng/mL）和 Dynabead CD3/CD28（25 K/孔）。使用各種組合的細(xì)胞因子（L-15，10 ng/mL；IL-6、IL-21 和 IFN?，100 ng/mL）處理細(xì)胞，并在第 2 天和第 5 天取樣 10 μL，采用 iQue^? 人 T 細(xì)胞記憶分析試劑盒進(jìn)行分析。

使用 IFN?（斜紋條柱）可使 IL-10 的分泌增加，同時也將 CD8+ 中央記憶型 T 細(xì)胞的比例提高到 3 倍，而 IFN? 與白介素（例如 IL-6）聯(lián)用沒有增加 IL-10 的分泌或 T_CM 的數(shù)量。

圖中展示的數(shù)據(jù)來自大型 panel 分析，該分析設(shè)計用于優(yōu)化過繼細(xì)胞療法生物制造的培養(yǎng)條件。熱圖顯示了所有測試的處理中的 TCM 細(xì)胞。藍(lán)色框標(biāo)出的是經(jīng) IFN? 處理，且與其他處理類型相比具有更高 T_CM 細(xì)胞比例的孔。

圖 3. ?誘導(dǎo) T 細(xì)胞的 CAR 表達(dá)時，具有高度自我更新能力的記憶細(xì)胞并不是總能保留。

HER-2 和 CD19 CAR-T 細(xì)胞經(jīng)凍融處理。使用 Dynabead CD3/CD28 將來自相同供體的對照 T 細(xì)胞活化 3 天。用 T 細(xì)胞記憶抗體 panel 標(biāo)記細(xì)胞（100 K/孔，5 個重復(fù)）以評估表型。(A) 圖中顯示了 T 細(xì)胞發(fā)育為不同的記憶 T 細(xì)胞表型時表面標(biāo)志物表達(dá)的改變。從左到右分別為：初始 T 細(xì)胞 (T_N)、干細(xì)胞樣記憶 T 細(xì)胞 (T_SCM)、中央記憶型 T 細(xì)胞 (T_CM)、移行記憶 T 細(xì)胞 (T_TM)、效應(yīng)記憶 T 細(xì)胞 (T_EM)、末端效應(yīng) T 細(xì)胞 (T_TE)、細(xì)胞死亡。(B) 活化的 T 細(xì)胞，(C) HER-2 CAR-T 記憶細(xì)胞表型，(D) CD19 CAR-T 記憶細(xì)胞表型。

提高分析效率

圖 4.不同供體的記憶 T 細(xì)胞發(fā)育變化。

將來自 3 個單獨(dú)供體的 PBMCs（120 K/孔）與 Ramos 細(xì)胞共培養(yǎng)（3:1 E:T 比例），并用數(shù)量遞增的 Dynabead CD3/CD28 進(jìn)行活化。在 72 h 時，使用 iQue^? 人 T 細(xì)胞記憶分析試劑盒分析 10 μL 樣本。

(A) 供體 1，(B) 供體 2，(C) 供體 3，三張圖表中展示了在記憶 T 細(xì)胞發(fā)育的各個階段表達(dá)蛋白的 CD3+ 細(xì)胞百分比和 IL-10 的釋放數(shù)據(jù)。圖中的藍(lán)色柱代表沒有活化因子的對照組?；疑?3 個依次遞增的 Dynabead 濃度（由淺至深）：60 K、120 K 和 480 K 微珠/孔。

簡化數(shù)據(jù)分析

圖 5.利用 iQue^? ForeCyt^? 上的預(yù)先設(shè)門功能進(jìn)行 T 細(xì)胞亞群的自動表型分析

使用各種密度的 Dynabead CD3/CD28 對來自 3 個不同供體的 PBMC（120 K/孔）進(jìn)行活化。在第 3 天，使用 iQue^? 人 T 細(xì)胞記憶分析試劑盒進(jìn)行分析。(A) 圖中展示了用于區(qū)分記憶 T 細(xì)胞集群的中央記憶型 T 細(xì)胞 (T_CM)、移行記憶 T 細(xì)胞 (T_TM)，以及效應(yīng)記憶 T 細(xì)胞 (T_EM) 的設(shè)門策略。(B) 熱圖中展示了來自每個供體的表達(dá) T_EM 表型的 T 細(xì)胞比例。在較低的 Dynabead 密度下，供體 2 形成 T_EM 表型的敏感性要強(qiáng)于供體 1 和供體 3。(C) 圖中將來自 (B) 圖的數(shù)據(jù)匯總為濃度響應(yīng)曲線。

節(jié)省時間和寶貴的樣本

圖 6.使用清晰易懂的方案，通過 iQue^? 人 T 細(xì)胞記憶分析試劑盒進(jìn)行 T 細(xì)胞表型和細(xì)胞因子釋放分析。

采用細(xì)胞和微球混合分析，采集單個孔中的細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)數(shù)據(jù)和上清液細(xì)胞因子的濃度數(shù)據(jù)。這一簡化的工作流程不需要進(jìn)行額外的優(yōu)化或稀釋操作，僅需要一個清洗步驟，助您盡可能縮短獲得結(jié)果的時間。

訂購信息

人 T 細(xì)胞記憶分析試劑盒
平臺：兼容 iQue^? 3/iQue^? Screener PLUS - VBR 配置
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