使用 Incucyte^? Fabfluor-pH 抗體標記試劑和自動化分析工具可輕松地可視化并檢測抗體內(nèi)化隨時間的變化。

將 HT1080 細胞用 Incucyte^? Fabfluor-pH 標記的 α-CD71 或 IgG1 同型對照 (4 μg/mL) 進行處理，在 12 小時內(nèi)每 30 分鐘采集一次 HD 相和紅色熒光圖像，所用放大倍數(shù)為 10 倍。經(jīng) Fabfluor-α-CD71 處理的細胞圖像在細胞質(zhì)中顯示出紅色熒光 (A)。經(jīng)標記的同型對照處理的細胞不顯示熒光 (B)。自動生成隨時間推移的紅色對象區(qū)域，顯示在經(jīng)標記的 α-CD71 處理的細胞中迅速增加，而經(jīng)同型對照處理后的細胞中則沒有信號 (C)。所示圖像在處理后 6 小時采集得到，顯示的數(shù)據(jù)為 3 個孔的平均值 ± SEM。

區(qū)分由細胞表面抗原表達驅(qū)動的多種細胞類型的內(nèi)化響應的差異。

將 Jurkat（T 細胞樣）和 Raji（B 細胞樣）細胞（30,000 個細胞/孔）用各種 Incucyte^? Fabfluor-pH 標記的抗體 (4 μg/mL) 處理以顯示特定的性質(zhì)。使用 20 倍物鏡在 12 小時內(nèi)每 30 分鐘采集一次高清相位和紅色熒光圖像。時程數(shù)據(jù)（A 和 B）表明，兩種細胞系中的響應特征與所測試的標記的預期表達譜相匹配，并且證實內(nèi)化響應僅在表達特定抗原時才會出現(xiàn)。請注意，該分析方法可以區(qū)分 Raji 細胞相比于 Jurkat 細胞的響應差異（α-CD71 的響應曲線更陡峭，因此內(nèi)化速率更快）。曲線下面積 (AUC) 分析展示了兩種細胞系的總體特征 (C)。顯示的所有數(shù)據(jù)均為至少 4 個孔的平均值 ± SEM，所示時程數(shù)據(jù)為歸一化的紅色區(qū)域。

揭示濃度依賴性響應并進行藥理分析。

使用簡單的即混即讀方案，用濃度不斷增加的 Fabfluor-pH 標記的赫賽汀處理 BT-474 Her2 陽性細胞。時程圖顯示，隨著赫賽汀濃度的增加，歸一化的紅色區(qū)域隨時間推移不斷增加 (A)；該響應的曲線下面積分析表現(xiàn)出明顯的濃度依賴性響應，EC50 為 323 ng/mL (B)。顯示的所有數(shù)據(jù)均為 3 個孔的平均值 ± SEM，所示時程數(shù)據(jù)為歸一化的紅色區(qū)域。