使用基于圖像的測量結(jié)果，追蹤各種細(xì)胞類型中多個細(xì)胞分裂的細(xì)胞周期進(jìn)程。利用您的培養(yǎng)箱所提供的穩(wěn)定培養(yǎng)環(huán)境與我們的新型 Incucyte^? 細(xì)胞周期慢病毒試劑（不干擾細(xì)胞健康和形態(tài)），保持生理相關(guān)性。

圖 1. 通過自動化圖像采集和集成式分析，生成基于圖像的多個細(xì)胞分裂中細(xì)胞周期轉(zhuǎn)變的測量結(jié)果。感染 Incucyte^? 細(xì)胞周期綠色/紅色慢病毒的 HeLa 細(xì)胞在 G1 期表現(xiàn)出紅色熒光，在 S/G2/M 期表現(xiàn)出綠色熒光 (A)。黃色細(xì)胞正在從 G1 期過渡到 S 期，而非熒光細(xì)胞則正在從 M 期轉(zhuǎn)變至 G1 期。使用 Incucyte^? Cell-by-Cell 分析進(jìn)行定量，可實現(xiàn)如黃色 mask 所示的準(zhǔn)確掩膜處理 (B)，并基于紅色和綠色熒光進(jìn)行分類（C 和 D）。圖 E 顯示了細(xì)胞周期持續(xù)時間的定量結(jié)果，其中將轉(zhuǎn)染有 Incucyte^? 細(xì)胞周期綠色/紅色慢病毒的 HeLa 細(xì)胞用胸苷（2.5 mM，24 h）處理以將細(xì)胞阻止在 S/G2/M 期。解除該阻斷后，細(xì)胞發(fā)生同步分裂 (M-G1-S/G2/M)。數(shù)據(jù)顯示，細(xì)胞周期為 17 h（峰間持續(xù)時間）。顯示的數(shù)據(jù)為 6 個孔的平均值 ± SEM。

圖 2. 通過無干擾試劑在活細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生直接測量結(jié)果。將 Incucyte^? 細(xì)胞周期綠色/紅色慢病毒穩(wěn)定地引入細(xì)胞的過程不產(chǎn)生干擾。圖像顯示，親本細(xì)胞與轉(zhuǎn)染后的 MDA-MB-231 細(xì)胞表現(xiàn)出相同的形態(tài)，并且圖像分析表明對細(xì)胞生長沒有影響。

利用 Incucyte^? 方便易用的端到端解決方案，加快獲得結(jié)果的速度。遵循簡單的活細(xì)胞標(biāo)記方案 - 無需進(jìn)行細(xì)胞固定和分離操作。使用簡便易用的專用軟件工具，在 96 孔或 384 孔板中自動采集和分析。使用 Incucyte^? Cell-by-Cell 分析軟件模塊輕松生成圖表以揭示細(xì)胞周期階段分布的動力學(xué)變化。

圖 3 .Incucyte^? 細(xì)胞周期慢病毒快速指南。使用簡單的標(biāo)記方案穩(wěn)定地表達(dá)熒光泛素化細(xì)胞周期指示劑 (FUCCI) - 無需進(jìn)行細(xì)胞固定和分離操作。

將 Incucyte^? 細(xì)胞周期慢病毒與 Cell-by-Cell 分析相結(jié)合，追蹤單獨(dú)鑒別的細(xì)胞周期階段以評價藥物治療效果，或?qū)⑺幬镎T導(dǎo)的細(xì)胞周期停滯與細(xì)胞分化聯(lián)系起來。

圖 4. 測量隨時間推移，藥物對細(xì)胞周期階段分布的影響。經(jīng)順鉑或 5-氟尿嘧啶 (5FU) 處理后，HT1080 纖維肉瘤細(xì)胞分裂的時程。 在表達(dá) Incucyte^? 細(xì)胞周期綠色/紅色慢病毒的 HT1080 細(xì)胞中測定細(xì)胞周期階段。 使用 Cell-by-Cell 分析軟件分析圖像，并基于綠色和紅色熒光對細(xì)胞亞群進(jìn)行分類。 微孔板視圖（頂行）顯示了順鉑和 5FU 相比于溶媒在 30 h 內(nèi)對 G1 期（紅色細(xì)胞群）、S/G2/M 期（綠色細(xì)胞群）和 G1-S 期（橙色細(xì)胞群）的濃度和時間依賴性影響。 在處理后 24 h 采集的濃度響應(yīng)曲線（底行）顯示，經(jīng)順鉑處理后，處于 G1 期的細(xì)胞群減少，處于 S/G2/M 期的細(xì)胞群增加，且處于 G-S 期的細(xì)胞群減少，與其干擾有絲分裂的效應(yīng)一致。 經(jīng) 5FU 處理后，處于 G1 期的細(xì)胞群增加，處于 S/G2/M 期和 G1-S 期的細(xì)胞群減少，與其對 DNA 合成的影響一致。顯示的值為 6 個孔的平均值 ± SEM。

圖 5. 觀察藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞周期停滯對細(xì)胞形態(tài)和功能的影響。將穩(wěn)定表達(dá) Incucyte^? 細(xì)胞周期綠色/紅色慢病毒的 THP-1 單核細(xì)胞暴露于溶媒或佛波醇 12-十四酸酯 13-乙酸酯 (PMA; 100 nM)，并使用 Cell-by-Cell 分析軟件分析。PMA 導(dǎo)致細(xì)胞分化，使細(xì)胞周期停滯在 G1 期 (A)。分析表明，與溶媒處理后的細(xì)胞相比，缺乏增殖 (B)，紅色細(xì)胞（處于 G1 期）百分比增加，綠色細(xì)胞（處于 S/G2/M 期）減少 (C)。使用 Incucyte^? pHrodo^? 紅色細(xì)胞標(biāo)記的凋亡 Jurkat 細(xì)胞的胞葬作用 (E) 顯示，PMA 處理后的細(xì)胞面積也更大 (D)，表明細(xì)胞形態(tài)會隨著吞噬能力的增加相應(yīng)改變。