Incucyte^? 活細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)分析方案將自動(dòng)化成像分析的強(qiáng)大功能與簡(jiǎn)單易用的抗體標(biāo)記方法相結(jié)合，可在組織培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行基于圖像的表面蛋白表達(dá)動(dòng)力學(xué)測(cè)定。

活細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)分析為長(zhǎng)期跟蹤和定量細(xì)胞表面蛋白標(biāo)記物提供了強(qiáng)大的解決方案，且隨后還可以將標(biāo)記物與細(xì)胞功能和形態(tài)相關(guān)聯(lián)，從而更深入地洞察細(xì)胞過(guò)程。

圖 1. Incucyte^? Fabfluor-488 染料熒光的自動(dòng)分析結(jié)果顯示，PD-L1 的表達(dá)隨細(xì)胞類(lèi)型、時(shí)間和濃度的增加而增加（右圖）。在含有 Incucyte^? Fabfluor-488-α-PD-L1 抗體復(fù)合物和 Incucyte^? Opti-Green 背景抑制劑的情況下，將帶有 Incucyte^? Nuclight 紅色標(biāo)記 MDA-MB-231（乳腺）或 SKOV-3（卵巢）癌細(xì)胞與 IFNγ 共培養(yǎng)。綠色熒光區(qū)域的定量結(jié)果表明，在 IFNγ 的誘導(dǎo)下，MDA-MB-231 細(xì)胞中 PD-L1 的表達(dá)呈時(shí)間和濃度依賴(lài)性增加。時(shí)程曲線顯示了 MDA-MB-231（高表達(dá)）和 SKOV-3（中表達(dá)）細(xì)胞中 PD-L1 的表達(dá)差異。

圖 2. 將細(xì)胞表面標(biāo)志物、吞噬細(xì)胞活力和增殖檢測(cè)的多重分析和形態(tài)學(xué)觀察應(yīng)用于分化研究（右圖）。在 CD11b、CD14 或 CD40 復(fù)合 Incucyte^? Fabfluor-488 抗體存在的情況下，將 THP-1 單核細(xì)胞暴露于培養(yǎng)基（未分化）、維生素 D3 或 PMA 中。與培養(yǎng)基單獨(dú)處理或維生素 D3 處理的細(xì)胞相比，PMA 處理后細(xì)胞形態(tài)顯示出明顯的變化（高清相差圖片）。動(dòng)態(tài)圖突出顯示了不同處理?xiàng)l件下，細(xì)胞表面蛋白表達(dá)的差異性和時(shí)間依賴(lài)性。有趣的是，在檢測(cè) Incucyte^? pHrodo^? 紅色細(xì)胞標(biāo)記試劑盒標(biāo)記的 Jurkat 凋亡細(xì)胞的胞葬作用時(shí)，PMA 會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖（匯合）減少，同時(shí)吞噬能力增加，而培養(yǎng)基或維生素 D3 處理則未出現(xiàn)這種結(jié)果。

（視頻）在免疫細(xì)胞殺傷模型中，確認(rèn)細(xì)胞間相互作用隨時(shí)間的變化。在含有 Incucyte^? Fabfluor-488 標(biāo)記的 CD8 抗體的情況下，將帶有 Incucyte^? Nuclight 紅色標(biāo)記的 A549 肺癌細(xì)胞與人 PBMCs 共培養(yǎng)。CD3/IL-2 對(duì) PBMC 的活化提高了 PBMCs?與腫瘤細(xì)胞的相互作用。免疫細(xì)胞的 Incucyte^? Fabfluor-488-CD8 標(biāo)記證實(shí)了細(xì)胞極性，其中 PBMC的 CD8+ 區(qū)域看上去與 A549 腫瘤細(xì)胞有所接觸。

圖 5. Incucyte^? Fabfluor-488 染料顯示出表面標(biāo)志物表達(dá)隨時(shí)間變化的特異性和持久性。Ramos（B 細(xì)胞樣）細(xì)胞在多種 Incucyte^? Fabfluor-488 標(biāo)記抗體和 Incucyte^? Opti-Green 存在的環(huán)境下生長(zhǎng)。從圖中可以觀察到非特異性 (CD45) 和特異性 (CD20) B 細(xì)胞標(biāo)記物的長(zhǎng)期標(biāo)記。T 細(xì)胞標(biāo)記 (CD3) 或同型對(duì)照抗體則未觀察到熒光信號(hào)。 當(dāng) Ramos 和 Jurkat（T 細(xì)胞樣）細(xì)胞以固定比例混合時(shí)，可檢測(cè)到預(yù)期水平的 CD20 染色，證明了 CD20 在混合培養(yǎng)中的作用。