獲取精確數(shù)量細(xì)胞以進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
在許多應(yīng)用中，如測(cè)量富集率或評(píng)估靈敏度和特異性，需要使用精確數(shù)量的細(xì)胞以保證高質(zhì)量插入作為參考樣品。傳統(tǒng)的細(xì)胞分選技術(shù)如 FACS 或單細(xì)胞打印不能保證將如此精確數(shù)量的細(xì)胞沉積到目標(biāo)孔/管中。
CellCelector平臺(tái)結(jié)合我們的納米孔板技術(shù)，進(jìn)行細(xì)胞數(shù)量計(jì)算，精確和溫和地分離出精確數(shù)量的細(xì)胞，精確獲取 1、5、10、50或100個(gè)完整細(xì)胞。例如，如果您的分析需要精確的 1、5、10、50 或 100 個(gè)細(xì)胞，您可以使用 CellCelector 精確獲取 1、5、10、50 或 100 個(gè)完整細(xì)胞。
圖 1.CellCelector支持分離轉(zhuǎn)移細(xì)胞到任何標(biāo)準(zhǔn)或定制孔板、管或小瓶中。
工作流程
通過(guò) CellCelector 平臺(tái)分離精確數(shù)量細(xì)胞包括以下幾個(gè)步驟：(i) 在 CellCelector S200 ULA 納米孔板?中接種細(xì)胞，細(xì)胞密度與每個(gè)納米孔的目標(biāo)細(xì)胞數(shù)相對(duì)應(yīng)；(ii) 對(duì)納米孔中的細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)掃描并計(jì)數(shù)；(iii) 自動(dòng)選擇填充目標(biāo)細(xì)胞數(shù)量的納米孔；(iv) 操作人員驗(yàn)證列表；(v) 自動(dòng)將選定的細(xì)胞組轉(zhuǎn)移到目標(biāo)管/孔中，并完整跟蹤整個(gè)過(guò)程（圖 2）。
圖 2. CellCelector 自動(dòng)分離精確數(shù)量細(xì)胞的工作流程。
細(xì)胞接種統(tǒng)計(jì)
當(dāng)將單細(xì)胞懸液接種到納米孔板中時(shí)，平臺(tái)將隨機(jī)捕獲納米孔中的細(xì)胞。理想情況下，單細(xì)胞懸浮液均勻播種會(huì)遵循標(biāo)準(zhǔn)泊松分布。我們?cè)诖颂幫ㄟ^(guò)一個(gè)方程式來(lái)描述隨機(jī)捕獲納米孔中給定數(shù)量細(xì)胞 (k) 的概率 (p)，其中 λ 是每個(gè)納米孔的平均接種細(xì)胞數(shù)量。圖 3 顯示了幾種細(xì)胞接種密度下 S200 24 孔納米孔板的單個(gè)孔中的理論和實(shí)測(cè)細(xì)胞分布。可以通過(guò)此方法計(jì)算接種到 24 孔板每個(gè)孔中所需的細(xì)胞數(shù)量，以便最大限度地提高在納米孔內(nèi)捕獲所需數(shù)量細(xì)胞的概率。
圖 3.?接種細(xì)胞密度為 1、5、10 和 20 個(gè)細(xì)胞/納米孔時(shí)的理論（線）和實(shí)驗(yàn)（點(diǎn)）泊松分布。共計(jì)掃描和分析納米孔 2,500 個(gè)。
自動(dòng)孔掃描和細(xì)胞計(jì)數(shù)
如果細(xì)胞被熒光標(biāo)記，則可以在BF和任何熒光通道（圖3和圖4）中掃描種子孔。BF 和熒光模式下都可以進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞計(jì)數(shù)后，用戶可以在納米孔圖像庫(kù)中查看所有納米孔的圖像。
圖 4.?在 FITC 通道中掃描的一個(gè)孔的概覽圖像。其中圓圈內(nèi)的是掃描和分析區(qū)域。
圖 5.?200 μm 納米孔中的典型細(xì)胞分布，平均細(xì)胞密度為 20 個(gè)染色 SK-BR-3 細(xì)胞/納米孔。
左圖：明場(chǎng)，右圖：FITC。
圖 6.?使用 CellCelector 軟件自動(dòng)選擇的具有 5 個(gè)細(xì)胞的 12 個(gè)納米孔示例。
自動(dòng)回收（挑取）
一旦操作人員驗(yàn)證了要回收的納米孔列表，系統(tǒng)就會(huì)自動(dòng)對(duì)所有選中的納米孔進(jìn)行挑取。在挑取過(guò)程中，系統(tǒng)會(huì)在挑取前后自動(dòng)保存圖像，以便進(jìn)行質(zhì)量控制。該系統(tǒng)還可以將幾個(gè)納米孔的內(nèi)容物匯集到一個(gè)目標(biāo)管中，從而使更多細(xì)胞沉積，例如 20 個(gè)細(xì)胞 = 2 個(gè)納米孔x 10 個(gè)細(xì)胞，100 個(gè)細(xì)胞 = 5 個(gè)納米孔x 20 個(gè)細(xì)胞。
圖 7.?挑取一組 20 個(gè)細(xì)胞的示例。自動(dòng)保存挑取前后的圖像。
被挑取的細(xì)胞100%沉積到目的孔中。如果將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到平底板或管中，可以使用 CellCelector 軟件輕松地觀察沉積的細(xì)胞并計(jì)數(shù)（圖 8）。
圖 8.檢測(cè)沉積在光學(xué)平底 PCR 管中的 20 個(gè)細(xì)胞。
記錄
用戶可以導(dǎo)出所有數(shù)值數(shù)據(jù)，包括源板和目標(biāo)板的完整跟蹤信息以及與所選納米孔相關(guān)的所有圖像（掃描、挑取前/后等）。
圖 9. 分離到目標(biāo) 96 孔板特定孔中的細(xì)胞在挑取前的納米孔圖像庫(kù)示例。
使用 CellCelector 工作流程分離精確數(shù)量細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)
出色性能
- 保證分離精確數(shù)量細(xì)胞的不二選擇，甚至可以僅分離單個(gè)細(xì)胞
- 基于圖像進(jìn)行可靠確認(rèn)，確保無(wú)遺漏細(xì)胞
- 高達(dá)100% 挑取效率，無(wú)細(xì)胞殘留或丟失
- 細(xì)胞處理非常溫和
靈活
- 兼容各種細(xì)胞大小和類型
- 同時(shí)適用于固定和活細(xì)胞
- 在明場(chǎng)和/或熒光條件下自動(dòng)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)
- 靈活的分離方案：可使整個(gè)目的板上的孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量相同，或創(chuàng)建不同數(shù)量的細(xì)胞分配方案，例如1、2、5、10、20個(gè)細(xì)胞/孔。
- 可以按照固定比例混合多個(gè)細(xì)胞群
易于操作
- 樣品制備簡(jiǎn)單
- 用戶友好型軟件
- 無(wú)需日常維護(hù)