如何提高關(guān)鍵蛋白質(zhì)樣品的回收率:針頭濾器濾膜、體積和pH值的影響
樣品制備過程中的蛋白質(zhì)損失是生物學(xué)、生物技術(shù)和生物制藥領(lǐng)域?qū)崿F(xiàn)產(chǎn)品可靠定量的障礙。面對(duì)這類挑戰(zhàn),我們選擇了四種典型的針頭濾器,并在各種樣品條件下,量化了包含兩種不同抗體在內(nèi)的四種模型蛋白質(zhì)的回收率,以滿足眾多生物、生物技術(shù)和生物制藥應(yīng)用的要求。
選擇具有最小蛋白質(zhì)吸附趨勢(shì)的濾膜至關(guān)重要,不過吸附不僅取決于膜類型,還受到pH和表面電荷等樣品和蛋白質(zhì)特性,以及特定處理步驟(包括每單位過濾面積的樣品量)的影響。正因如此,確定合適的條件以顯著降低分析物損失能將是一個(gè)復(fù)雜的多參數(shù)問題,我們使用的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(DoE)方法可以提供相關(guān)指南,以說明能夠在樣品制備過程中顯著降低分析物損失的條件和膜類型。