利用 Incucyte^? 免疫細胞殺傷實驗可視化免疫細胞/腫瘤細胞的相互作用。(1) 細胞毒性 T 細胞（較?。┖蜆擞浀哪[瘤細胞（較大，紅色）之間的物理接觸。T 淋巴細胞分裂。(2) 腫瘤細胞被細胞毒性 T 淋巴細胞攻擊：“死亡之吻”。(3) 腫瘤細胞形成胞質顆粒，半胱天冬酶 3/7 標記（綠色），核固縮，細胞死亡。(4) 腫瘤細胞有絲分裂：一個細胞分裂為兩個。

使用 Incucyte^? 免疫細胞殺傷試驗實時檢測腫瘤細胞的死亡和增殖（可選）。Incucyte^? 軟件易于操作，可直接根據(jù)圖像檢測凋亡的腫瘤細胞（綠色無題，黃色輪廓），實時對活腫瘤細胞計數(shù)（Incucyte^? NucLight 紅色染料標記的細胞核，藍色輪廓）。動力學讀數(shù)顯示治療效果呈時間依賴性。

靶細胞和細胞因子時間進程分析。用 PMBCS 去除 SKOV-3 NucLight 綠色細胞，使用 CD3/CD28 磁珠 (Dynabead) 進行活化。(A) 采用 Incucyte^? 分析的靶細胞計數(shù)的時間進程。使用 TCA 試劑盒的 Qbead 組分（Qbeads 或 Assay Builder：IFNγ，選項 1 和 TNFα，選項 2）對僅使用 10 μL/天上清液樣品的 (B) IFNγ 和 (C) TNFα 的細胞因子時間進程數(shù)據(jù)進行定量分析/(D) 根據(jù)靶細胞計數(shù) (Incucyte^?) 和細胞因子 (iQue^??3) 的經時變化繪制的 AUC 濃度響應曲線。

CD3xCD19 BiTE 抗體誘導細胞毒性和靶細胞聚集。Ramos NucLight 綠色細胞與 PBMC 共同接種，使用 BiTE 抗體 (anti-hCD3xCD19) 或對照抗體 (anti-hCD3xβGAL) 激活。在 (A) 對照抗體或 (B) BiTE 抗體的存在下 72 小時的代表性圖像。跟蹤靶細胞數(shù)量 (C) 和聚集 (E) 的 Incucyte^? 時間進程數(shù)據(jù)（每 3 小時采集一次圖像）。采用包括亮度和大小的綠色累積強度度量 (GCU × μm²) 的折射率變化來定量靶細胞。與對照抗體相比，BiTE 抗體存在時靶細胞殺傷 (D) 和聚集 (F) 的 72 小時濃度響應曲線。

活化的 PBMC 對腫瘤球增殖的影響。將穩(wěn)定表達核限制性 RFP 的 A549 腫瘤細胞接種在一個圓底 ULA 96 孔板中，培養(yǎng) 3 天，待其形成腫瘤球。腫瘤球形成后，在含或不含 Anti-CD3 和 IL-2 抗體混合物的條件下，與新分離的 PBMC 進行共培養(yǎng)。Incucyte^? HD 相位圖和熒光圖像顯示了 PBMC 在不含抗-CD3 和 IL-2 抗體（未活化，上圖）和含抗-CD3 和 IL-2 抗體（已活化，下圖）的情況下對腫瘤球增殖的影響對比。注意到，活化的 PBMC 存在時，腫瘤球的熒光強度明顯減弱。時程圖顯示了腫瘤球的細胞毒性（根據(jù)熒光強度隨時間的損失來定量）。數(shù)據(jù)收集時間為 7 天，每間隔 6 小時采集一次圖像。每個數(shù)據(jù)點代表平均值 ± SEM，n = 3 孔。

白細胞滲出的可視化處理。將 CD3/CD28 Dynabead 活化的原代 T 細胞接種到單層 HUVEC 細胞（由纖連蛋白培養(yǎng)）上，使用 Incucyte^? 系統(tǒng)每分鐘采集一次圖像。黃色和橙色箭頭表示白細胞在 HUVEC 細胞之間移動，最終沿著 ClearView 插入物的孔隙（藍色圓圈）移動。

原代 T 細胞向 CXCL12 外滲。將 CD3/CD28 Dynabead 活化的原代 T 細胞接種到纖連蛋白培養(yǎng)的 HUVEC 單層膜上。然后，將含 T 細胞的插入物（HUVEC 單層共培養(yǎng)物）在指示濃度下暴露于 CXCL12 梯度中。使用 Incucyte^? ZOOM 每 30 分鐘采集一次圖像，并進行相位分析。在 t = 6 小時進行藥理學反應分析。每個數(shù)據(jù)點代表平均值 ± SEM，n = 4