圖 1.?使用 iQue^? 高通量流式細(xì)胞儀平臺(tái)對(duì)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞進(jìn)行體外分析的方案示意圖。

• 定量分析免疫細(xì)胞浸潤(rùn)對(duì)刺激的反應(yīng)。
• 了解浸潤(rùn)細(xì)胞和非浸潤(rùn)細(xì)胞活化特征的表型差異，確定腫瘤微環(huán)境的影響。

圖 2.(A) 浸潤(rùn)到乳腺癌腫瘤球中的 CD3+ PBMC 呈濃度依賴性增加。

BT474（4,000 個(gè)細(xì)胞/孔）腫瘤球形成 72 小時(shí)后，再添加 PBMC（20,000 個(gè)細(xì)胞/孔）和 CD3/CD28 Dynabead。使用 CD3/CD28 Dynabead 激活 PBMC 會(huì)導(dǎo)致 CD3 T 細(xì)胞以濃度依賴性方式浸潤(rùn)到乳腺癌腫瘤球中。微球密度最高 (20K) 時(shí)，PBMC 開(kāi)始?xì)⑺滥[瘤球，隨著腫瘤球受到攻擊，浸潤(rùn)減少。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)代表平均值 ± SEM，n = 8。

與非浸潤(rùn)細(xì)胞相比，(B) 和 (C) 浸潤(rùn)細(xì)胞的活化標(biāo)志物表達(dá)水平更高。 使用 T 細(xì)胞活化和細(xì)胞因子分析試劑盒 (TCA)??收集和標(biāo)記非浸潤(rùn)細(xì)胞。然后，分離腫瘤球并標(biāo)記浸潤(rùn)細(xì)胞。浸潤(rùn)細(xì)胞表達(dá)更高水平的 CD69（早期）、CD25（中期）和 HLA-DR（晚期）活化標(biāo)志物。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)代表平均值 ± SEM，重復(fù)測(cè)定 8 次。

圖 3.T 細(xì)胞的腫瘤球浸潤(rùn)具有細(xì)胞類型特異性，并受基質(zhì)細(xì)胞調(diào)節(jié)。

(A)?A549、SKOV-3 或 BT474（5,000 個(gè)細(xì)胞/孔）腫瘤球形成 72 小時(shí)后，再添加預(yù)活化的 (CD3/CD28 Dynabeads^?) PBMC（25,000 個(gè)細(xì)胞/孔）。所示數(shù)據(jù)代表每種癌癥有 3 個(gè)供體。CD3 浸潤(rùn)取決于癌癥類型。(B) CD8:CD4 比值也因癌癥類型不同而有所差異，它是反映治療結(jié)果和病理完全反應(yīng) (pCR) 可能性的指標(biāo)。 (C) 將 BT474 單獨(dú)或按 1:1 比例將其與 CCD1068SK 成纖維細(xì)胞混合形成腫瘤球 72 小時(shí)后，再接種預(yù)活化的 PBMC。納入成纖維細(xì)胞使 CD3+ 細(xì)胞的腫瘤球浸潤(rùn)顯著減少 (>60%)。

可以同時(shí)從多個(gè)板采集數(shù)據(jù)并分析，從而更快地獲得結(jié)果。

圖 4.集成式 iQue Forecyt^? 軟件可快速分析數(shù)據(jù)，縮短數(shù)據(jù)處理時(shí)間。

TCA 試劑盒具有一個(gè)預(yù)定義設(shè)門模板，可通過(guò)輕松設(shè)置實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化處理?？梢酝ㄟ^(guò)定義陽(yáng)性（綠色）和陰性（紅色）細(xì)胞群來(lái)調(diào)整設(shè)門，從而自動(dòng)更新孔板視圖讀數(shù)。然后，可以按照簡(jiǎn)單易用的向?qū)⒖装逡晥D轉(zhuǎn)換成濃度響應(yīng)曲線。

得益于快速采樣，重復(fù)測(cè)定次數(shù)得以增加，因此可以減輕高度可變的生物學(xué)特征所存在的分析挑戰(zhàn)。

圖 5.在分離腫瘤球后，使用 iQue^? 高通量流式細(xì)胞儀平臺(tái)對(duì) CD3 細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)行定量分析，評(píng)估重復(fù)測(cè)定次數(shù)的影響。

借助 iQue^? 的高通量性能，用戶可以在不延長(zhǎng)采集時(shí)間的同時(shí)增加重復(fù)測(cè)定次數(shù)，從而加快可變生物學(xué)效應(yīng)的研究。

96 孔板：

• 4 次重復(fù)測(cè)定（每 4 次清洗一次，每 4 次搖晃一次，吸取時(shí)間 5 秒）21 分鐘 32 秒
• 8 次重復(fù)測(cè)定（每 8 次清洗一次，每 4 次搖晃一次，吸取時(shí)間 5 秒）19 分鐘 8 秒