線粒體膜電位分析

Incucyte^? 線粒體膜電位分析

線粒體膜電位（MMP 或 ΔΨm）是在電子傳遞鏈合成 ATP 時(shí)，維持合成所需氫離子電化學(xué)勢(shì)的基本組成部分，并已證明是維持線粒體健康的重要因素。在正常生理活動(dòng)下，MMP 保持相對(duì)穩(wěn)定。然而，長(zhǎng)期的干擾會(huì)對(duì)細(xì)胞健康和活力產(chǎn)生不利影響，導(dǎo)致各種病理生理問題。MMP 的監(jiān)測(cè)可提供早期線粒體完整性的靈敏指標(biāo)，對(duì)于識(shí)別與糖尿病、癌癥和神經(jīng)退行性疾病等病理性疾病相關(guān)的線粒體功能障礙非常關(guān)鍵。

評(píng)估 MMP 的常用分析通常依賴于間接的串聯(lián)終點(diǎn)測(cè)定，難以通過形態(tài)變化進(jìn)行驗(yàn)證。Incucyte^? 線粒體膜電位分析方案能夠?qū)崟r(shí)檢測(cè)活細(xì)胞中 MMP 的瞬時(shí)和長(zhǎng)期變化，并可以與細(xì)胞標(biāo)記、細(xì)胞凋亡或細(xì)胞毒性試劑聯(lián)合使用，進(jìn)一步評(píng)估細(xì)胞健康。持續(xù)追蹤 MMP 變化，揭示細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和疾病的復(fù)雜性。

應(yīng)用

Incucyte^? 線粒體膜電位分析簡(jiǎn)介

Incucyte^? 線粒體膜電位分析可提供一種綜合性解決方案，支持在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)實(shí)時(shí)自動(dòng)觀察和定量分析 MMP 變化。與 TMRE 和 TMRM 分析類似，Incucyte^? MMP 橙色試劑可滲透細(xì)胞，并在活性線粒體中累積，與線粒體膜電化學(xué)梯度產(chǎn)生的 ΔΨm 成比例。 ?MMP 下降表示線粒體的功能和/或完整性受到干擾，也可將其用作細(xì)胞凋亡的早期指標(biāo)。

該分析試劑盒使用兩種對(duì)照化合物：FCCP，一種解偶聯(lián)劑，可轉(zhuǎn)運(yùn) H+ 離子穿過線粒體膜并使線粒體膜去極化（表現(xiàn)為熒光減少）；寡霉素 A，一種 ATP 合酶抑制劑，可導(dǎo)致膜超極化（表現(xiàn)為熒光增加）。

關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)

評(píng)估線粒體壓力?-使用便捷的即混即讀方案對(duì)線粒體壓力進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)定
檢測(cè)活細(xì)胞中 MMP 的變化?-?自動(dòng)生成定量且可重現(xiàn)的活細(xì)胞中 MMP 的測(cè)定數(shù)據(jù) - 全部分析在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)完成
監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)變化并結(jié)合細(xì)胞健康試劑進(jìn)行多重分析?-?可觀察細(xì)胞形態(tài)隨時(shí)間的變化，結(jié)合細(xì)胞凋亡或細(xì)胞毒性讀數(shù)，評(píng)估與代謝變化相關(guān)的細(xì)胞健康變化

評(píng)估線粒體壓力

利用 Incucyte^? MMP 橙色試劑盒，通過便捷的即混即讀方案快速可視化和定量分析 MMP 的變化。

檢測(cè)活細(xì)胞中 MMP 的變化

自動(dòng)生成定量且可重現(xiàn)的活細(xì)胞中 MMP 的測(cè)定數(shù)據(jù)。通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度隨時(shí)間的變化定量分析 MMP 變化。

圖 1. 線粒體膜電位的動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)。在 Incucyte^? MMP 橙色染料存在的情況下，使用溶媒、喜樹堿、FCCP 或寡霉素處理 HeLa 細(xì)胞，然后監(jiān)測(cè)（隨時(shí)間變化）化合物對(duì)線粒體膜電位的影響 (A)。對(duì)照孔和藥物處理孔的平均熒光強(qiáng)度線性圖突出顯示了化合物誘導(dǎo) 0 小時(shí)和 40 小時(shí)的線粒體極化變化 (B)。使用 Incucyte^? Cell-by-Cell 分析軟件進(jìn)行無標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù) (C)。溶媒、FCCP、寡霉素（6 小時(shí)）、喜樹堿處理（40 小時(shí)）獲得的高清相位/熒光圖像 (D)。

監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)變化并結(jié)合細(xì)胞健康試劑進(jìn)行多重分析

Incucyte^? MMP 橙色試劑盒可與 Incucyte^? Caspase 3/7、Annexin V 或 Cytotox 染料聯(lián)合用于定量細(xì)胞凋亡或細(xì)胞毒性，以及觀察細(xì)胞形態(tài)隨時(shí)間的變化。

圖 2. 結(jié)合細(xì)胞健康讀數(shù)的多重線粒體膜電位測(cè)定。在 Incucyte^? MMP 橙色試劑和 Cytotox NIR 染料存在的情況下，使用蛋白激酶抑制劑十字孢堿 (SSP) 處理 HeLa 細(xì)胞，然后聯(lián)合評(píng)估化合物的細(xì)胞毒性及其對(duì)線粒體膜電位的影響 (A)。(B) 圖中顯示了 MMP 和 Cytotox NIR 檢測(cè)的濃度相應(yīng)曲線（24 小時(shí)數(shù)據(jù)）。(C) 圖中顯示了對(duì)照孔、0.3 μM SSP 處理孔和 3 μM SSP 處理孔的代表性高清相位 + 熒光圖像（在 24 小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)）。