探索單細(xì)胞克隆掀起的藥物細(xì)胞系開發(fā)新變革
您是否厭倦了在堆積成山的細(xì)胞培養(yǎng)板中接種成千上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，只是為了辨別這些細(xì)胞是否為單細(xì)胞、有活力的細(xì)胞或者是高產(chǎn)細(xì)胞？厭倦了篩選數(shù)百個(gè)平板只為了找到一個(gè)包含所有目標(biāo)基因并且滿足您目標(biāo)產(chǎn)量的克??？為什么要讓您的藥物細(xì)胞系開發(fā)寄希望于奇跡？借助 CellCelector 全自動(dòng)無(wú)損細(xì)胞分離系統(tǒng)，您可以快速有效地評(píng)估和驗(yàn)證您的克隆，然后再?zèng)Q定選擇哪一個(gè)。只需不到一周的時(shí)間，即可從單個(gè)細(xì)胞池中獲得大批量單克隆、有活力且高產(chǎn)的克隆體。您現(xiàn)在可以根據(jù)實(shí)際數(shù)據(jù)來(lái)可靠地預(yù)測(cè)克隆的未來(lái)，不必再以平板數(shù)量取勝。這將為您節(jié)省耗材和培養(yǎng)基成本、培養(yǎng)箱空間，但非常重要的是，通過避免錯(cuò)誤、第二輪克隆和不必要的支出，為達(dá)到您的項(xiàng)目目標(biāo)節(jié)省了寶貴的時(shí)間。了解更多單克隆細(xì)胞篩選信息，歡迎聯(lián)系我們。
融合了單克隆性證明和活力檢測(cè)的單細(xì)胞克隆篩選分離工作流程
CellCelector 現(xiàn)在可用于高通量單細(xì)胞克隆，從而快速生成藥物生產(chǎn)細(xì)胞系。只需進(jìn)行一輪克隆，同時(shí)工作流程中自動(dòng)生成可靠的圖像驗(yàn)證單克隆性（HT-NIC：基于納米孔陣列和圖像驗(yàn)證的高通量克隆技術(shù)）。
憑借對(duì)克隆的單克隆性和生存能力的綜合快速評(píng)估，以及克隆轉(zhuǎn)移到96 或384 孔板后的生長(zhǎng)率，CellCelector 單細(xì)胞克隆技術(shù)代表了下一代單細(xì)胞克隆方法?？捎行娲邢尴♂專↙D）、流式細(xì)胞分選（FACS）或單細(xì)胞打印技術(shù)等傳統(tǒng)方法。這種具有專利保護(hù)的新方法是與?ProBioGen AG?共同開發(fā)，并得到其他 CellCellector 客戶的一致好評(píng)。
CellCelector 納米孔細(xì)胞培養(yǎng)板
HT-NIC 方法基于?CellCelector 納米孔板?。 這些培養(yǎng)板具有多種不同的規(guī)格，每個(gè)孔底部有數(shù)千個(gè)微型的納米孔。在24 孔板中，每個(gè)孔有3000 個(gè)納米孔，整個(gè)納米孔板有72,000 個(gè)納米孔。通過納米孔有效地將細(xì)胞分隔開來(lái)。
盡管進(jìn)行了局部分離，但納米孔內(nèi)的細(xì)胞被同一種培養(yǎng)基所覆蓋，因此出現(xiàn)了有效的細(xì)胞共培養(yǎng)。池中的所有細(xì)胞將有助于細(xì)胞系的生長(zhǎng)，同時(shí)保持其單克隆性。產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)了行業(yè)領(lǐng)先的單細(xì)胞生長(zhǎng)率，即使是極難培養(yǎng)的細(xì)胞系。
基于納米孔板的CellCelector單細(xì)胞克隆工作流程
細(xì)胞鋪板方式與傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)板相似。鋪板后，按照經(jīng)典的泊松分布在每個(gè)納米孔內(nèi)隨機(jī)捕獲這些細(xì)胞。自動(dòng)掃描孔，然后自動(dòng)鑒別包含單細(xì)胞的所有納米孔，提供了一個(gè)可靠的基于圖像的單克隆性證明。 根據(jù)接種的細(xì)胞數(shù)量，每孔捕獲400-600個(gè)單細(xì)胞，可進(jìn)行分析。接種多個(gè)孔可使您從單個(gè)納米孔中捕獲約14,000個(gè)單細(xì)胞?所有這些均在一個(gè)納米孔板內(nèi)實(shí)現(xiàn)。?
單克隆性被證明后，細(xì)胞將在培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)3至6天，每個(gè)克隆可生長(zhǎng)20至75個(gè)細(xì)胞。與傳統(tǒng)的基于甲基纖維素的方法相反，基于CellCelector納米孔板的方法允許克隆在液體介質(zhì)中生長(zhǎng)?？寺」蚕硐嗤慕橘|(zhì)，但通過納米孔有效地將它們彼此隔開。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)為單細(xì)胞克隆后，再次掃描納米孔板并自動(dòng)選擇單克隆性且具有活力的克隆，并將其轉(zhuǎn)移到96或384孔板中進(jìn)行進(jìn)一步分析和放大。?
全自動(dòng)單克隆性證明： 納米孔中可靠的單細(xì)胞檢測(cè)
在傳統(tǒng)的單細(xì)胞克隆工作流程中，單個(gè)細(xì)胞被鋪到96 孔板中，由于細(xì)胞通常位于孔的邊緣，很難在明亮的區(qū)域進(jìn)行可靠的自動(dòng)單細(xì)胞檢測(cè)。因此，通常在克隆生長(zhǎng)后的第0 天手動(dòng)或追溯檢查指定克隆的單克隆狀態(tài)。但是為什么要在一個(gè)比單個(gè)細(xì)胞所占據(jù)的表面大100 倍的孔內(nèi)搜索一個(gè)細(xì)胞呢？用Cellcelector HT-NIC 方法，細(xì)胞被 200 μm的納米孔分離開來(lái)并清晰可見，即使在剛剛鋪好板后，或是細(xì)胞靠近納米孔邊緣的情況，也可以通過軟件自動(dòng)且準(zhǔn)確地識(shí)別。?
告別有限稀釋，CellCelector Flex 提供100% 單克隆性
在有限稀釋法（一種成熟的單細(xì)胞克隆方法）中，單克隆性基于統(tǒng)計(jì)學(xué)特性，其概率取決于根據(jù)泊松分布植入到每個(gè)孔中的細(xì)胞平均數(shù)量。為了控制單克隆孔的數(shù)量，通常每孔播種不超過0.2 個(gè)細(xì)胞。此外，僅約16% 的孔為單克隆，而其他孔保持空置。因此，要獲得400 個(gè)單細(xì)胞孔，需要播種超過25 個(gè)96 孔板。若每孔接種0.5 個(gè)細(xì)胞，可以使單細(xì)胞孔的數(shù)量加倍，但代價(jià)是非單克隆孔的數(shù)量顯著增加。
CellCelector HT-NIC 克隆方法通過自動(dòng)鑒別單細(xì)胞納米孔， 跟蹤其生長(zhǎng)到克隆，并將生長(zhǎng)的克隆無(wú)交叉污染地轉(zhuǎn)移到96 孔板中，從而提供100% 的單克隆孔，不依賴于樣品制備方法、細(xì)胞類型或用于鋪納米孔板的細(xì)胞密度。
圖片展示了通過CellCelector HT-NIC 克隆法和有限稀釋法所獲得單克隆孔的概率對(duì)比。
使用有限稀釋法獲得400 個(gè)單克隆孔，需要使用26 個(gè)96 孔板（0.2 個(gè)細(xì)胞/ 孔接種密度）或13 個(gè)96 孔板（0.5 個(gè)細(xì)胞/ 孔接種密度）。要達(dá)到相同數(shù)量的單克隆孔，只需CellCelector 納米孔板的一個(gè)大孔就足夠了。
單細(xì)胞克隆活率超過90%
有限稀釋法僅能實(shí)現(xiàn)10%-20%的生長(zhǎng)率。其他傳統(tǒng)方法如FACS單細(xì)胞分選或單細(xì)胞打印鋪板法可使單細(xì)胞在孔內(nèi)接種率大大提高，但通常流式細(xì)胞術(shù)伴隨高剪切力，并且轉(zhuǎn)移的單細(xì)胞存在于大量的培養(yǎng)基中，導(dǎo)致生長(zhǎng)率介于30%到64%之間。此外，這些方法需要特定且昂貴的帶有外源生長(zhǎng)因子的克隆培養(yǎng)基，并且不適合于難以生長(zhǎng)的細(xì)胞系，因?yàn)檫@些細(xì)胞根本無(wú)法從單個(gè)細(xì)胞中生長(zhǎng)。
在CellCelector HT-NIC方法中，所有鋪孔的細(xì)胞共享相同的培養(yǎng)基，通過釋放自然生長(zhǎng)因子而不損害克隆性，促進(jìn)彼此的生長(zhǎng)。只有在一個(gè)克隆被證明是單克隆的并且是高活力的之后，它才會(huì)被選中并溫和地轉(zhuǎn)移到96孔板中。因?yàn)樗F(xiàn)在已經(jīng)是一個(gè)可存活的小單克隆團(tuán)，而不是一個(gè)被轉(zhuǎn)移的孤單細(xì)胞，它將更容易在轉(zhuǎn)移后的大孔里繼續(xù)生長(zhǎng)。
在嚴(yán)格控制的無(wú)菌環(huán)境中獲取可靠的單細(xì)胞克隆
可將 CellCelector 系統(tǒng)置于生物安全柜內(nèi)，從而在無(wú)菌條件下進(jìn)行試驗(yàn)和克隆轉(zhuǎn)移?？梢圆捎秒S系統(tǒng)一起提供的標(biāo)準(zhǔn)潔凈柜或者定制機(jī)柜。為了進(jìn)一步提高細(xì)胞活力和分析穩(wěn)定性，CellCelector也可安裝在細(xì)胞孵育箱Flowbox中， 它結(jié)合了一個(gè)緊湊的層流細(xì)胞培養(yǎng)罩，能夠?qū)崿F(xiàn)溫度、濕度和二氧化碳控制，以及紫外燈殺菌等功能。
將 CellCelector 單細(xì)胞克隆用于細(xì)胞系開發(fā)的優(yōu)勢(shì)
簡(jiǎn)便易用
- 樣品制備簡(jiǎn)單
- 用戶友好型軟件，具有專為單細(xì)胞克隆而開發(fā)的功能
- 無(wú)需日常維護(hù)
出色性能
- 從單個(gè)細(xì)胞中獲得幾乎100%的克隆
- 一輪克隆即同時(shí)提供基于圖像的單克隆性證明和克隆活力評(píng)估
- 將克隆轉(zhuǎn)移至 96 孔板后，細(xì)胞存活率高達(dá) 95%
值得信賴
- 通過高質(zhì)量圖像穩(wěn)定且自動(dòng)地完成非標(biāo)記單細(xì)胞檢測(cè)，并證明單克隆性以向 FDA 提交
- 幾乎100% 選擇性回收克隆，無(wú)克隆間污染
- 采用一次性毛細(xì)管和納米孔板，避免項(xiàng)目間交叉污染
- 從單細(xì)胞到克隆再到轉(zhuǎn)移，實(shí)現(xiàn)所有克隆的可追溯性
- 自動(dòng)化克隆轉(zhuǎn)移質(zhì)量控制（捕獲/失敗）
節(jié)約成本
- 在 6 天內(nèi)獲得經(jīng)證實(shí)的有活力單克隆性克隆
- 在耗材、培養(yǎng)基和培養(yǎng)箱存儲(chǔ)空間方面顯著節(jié)約成本
- 24 孔納米孔板的一個(gè)孔即可產(chǎn)生 200-500 個(gè)靶克隆
- 無(wú)需通過額外的成像系統(tǒng)即可完成單克隆評(píng)估
靈活性強(qiáng)
- 可兼容多種細(xì)胞系（CHO、HEK293；NS0、PER.C6 等）
- 不限制細(xì)胞大小
- 可在一個(gè)平板內(nèi)運(yùn)行多達(dá) 24 個(gè)樣品，易于優(yōu)化細(xì)胞密度或培養(yǎng)基
- 可兼容多種應(yīng)用工作流程（單個(gè) B 細(xì)胞篩選、雜交瘤篩選、基因編輯、稀有單細(xì)胞分離等）
- 可兼容標(biāo)準(zhǔn)或定制源容器和目標(biāo)容器，如微孔板、培養(yǎng)皿、載玻片、過濾器、芯片、PCR板或管
