使用 CRISPR/Cas 進(jìn)行基因編輯:CellCelector 可作為靶向細(xì)胞分離和單細(xì)胞克隆的理想工具
CRISPR-Cas9 基因組編輯是一種對(duì)細(xì)胞進(jìn)行基因修飾的方法。該方法需要使用 Cas9 核酸酶(一種非特異性切割 DNA 的酶)和合成引導(dǎo) RNA 來轉(zhuǎn)染細(xì)胞,其中后者負(fù)責(zé)引導(dǎo) Cas9 核酸酶到 DNA 剪切位點(diǎn)。由此產(chǎn)生的雙鏈斷裂將激活細(xì)胞內(nèi)在修復(fù)系統(tǒng)。通過添加修復(fù)模板,同源定向修復(fù) (HDR) 可以在修復(fù)過程中插入序列,導(dǎo)致基因敲入突變。在沒有修復(fù)模板的情況下,細(xì)胞通過非同源末端連接 (NHEJ) 實(shí)現(xiàn)修復(fù)。但 NHEJ 經(jīng)常引入小片段的缺失或插入,使修復(fù)基因序列中斷,從而導(dǎo)致基因敲除突變。
然而,CRISPR-Cas9 編輯在不同細(xì)胞上可能會(huì)得到不同結(jié)果,最終生成異質(zhì)性細(xì)胞群。許多實(shí)驗(yàn)都要求細(xì)胞具有相同的遺傳背景。這可以通過單細(xì)胞克隆使其攜帶期望基因來實(shí)現(xiàn)。
CellCelector 是該應(yīng)用的有力工具。賽多利斯與 Probiogen AG 合作開發(fā)了一套新的?單細(xì)胞克隆方法— HT-NIC 法,此方法在多個(gè)方面都勝過了常用的克隆方法,如有限稀釋克隆法。有限稀釋克隆法需要稀釋單細(xì)胞使細(xì)胞彼此完全分離以達(dá)到單克隆性。然而,由于缺乏細(xì)胞間通訊,許多細(xì)胞可能不耐受單細(xì)胞稀釋并因此導(dǎo)致細(xì)胞大量丟失。我們的新方法可以正確解決這一問題。除此之外,HT-NIC 法還具有大幅節(jié)省成本和時(shí)間,集成了單克隆性和活力證明功能等優(yōu)勢。了解更多應(yīng)用于基因編輯技術(shù)的產(chǎn)品,請(qǐng)聯(lián)系我們!