類器官培養(yǎng) QC 概述
體外 3D 細(xì)胞培養(yǎng)，特別是人體類器官培養(yǎng)，為轉(zhuǎn)化疾病研究或建模、再生醫(yī)學(xué)和預(yù)測(cè)性精確療法開(kāi)辟了全新的視角。目前的技術(shù)已支持在體外生成各種干細(xì)胞 (SC) 分化的器官細(xì)胞類型，用于模擬復(fù)雜的組織，同時(shí)保持基因組的穩(wěn)定性和對(duì)藥物處理的反應(yīng)性。
因此，相比傳統(tǒng)的 2D 培養(yǎng)物，類器官具有明顯的優(yōu)勢(shì)，且在各種創(chuàng)新應(yīng)用方面具有空前的潛力。常規(guī)的類器官工作流程包括多個(gè)步驟；首先將干細(xì)胞從特定的器官/組織中分離出來(lái)，在 3D 類器官培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)、分化，然后對(duì)這些培養(yǎng)物進(jìn)行處理（例如基因操作、標(biāo)記等），最后將其用于下游分析（類器官工作流程圖）。為了將這些模型應(yīng)用于有意義的基礎(chǔ)研究、疾病建?；蛩幬锖Y選，需要采用特定且可靠的培養(yǎng)和分析方法，包括從培養(yǎng)質(zhì)量控制開(kāi)始的整個(gè)類器官工作流程中每個(gè)步驟的嚴(yán)格控制、優(yōu)化和記錄。
目前，類器官培養(yǎng)物的表征和優(yōu)化受限于生長(zhǎng)過(guò)程中形成 3D 細(xì)胞模型的可重現(xiàn)性及其監(jiān)測(cè)。
- 缺乏經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方案，以實(shí)現(xiàn)類器官形成的孔間可重現(xiàn)性，且數(shù)據(jù)通量較低
- 類器官圖像的采集涉及到耗時(shí)的手動(dòng)操作過(guò)程
- 需要借助第三方軟件的分析，且定量的信息有限
- 在采集類器官圖像期間無(wú)法控制環(huán)境，可能會(huì)導(dǎo)致分析結(jié)果差異
Incucyte? 類器官培養(yǎng) QC 應(yīng)用是一套完整的解決方案，由經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的 3D 細(xì)胞培養(yǎng)方案和相應(yīng)的軟件模塊組成，可實(shí)現(xiàn)分析對(duì)象的實(shí)時(shí)可視化和無(wú)標(biāo)記定量分析，優(yōu)化了類器官的培養(yǎng)條件。
應(yīng)用
Incucyte? 類器官培養(yǎng) QC 應(yīng)用
對(duì)多個(gè)組織樣本進(jìn)行數(shù)天、數(shù)周或數(shù)月的活細(xì)胞成像和分析，生成標(biāo)準(zhǔn)化且可重現(xiàn)的類器官數(shù)據(jù)。
利用成熟的方案和集成式分析加速類器官發(fā)現(xiàn)，為下游分析制備提供可重現(xiàn)的培養(yǎng)技術(shù)。 類器官培養(yǎng) QC 應(yīng)用可在生理相關(guān)環(huán)境中使用 Incucyte? 類器官分析軟件模塊和 Incucyte? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)對(duì) Matrigel? 液滴中的類器官大小、計(jì)數(shù)和形態(tài)進(jìn)行直接的無(wú)標(biāo)記分析。
Incucyte? 類器官工作流程
Incucyte? 類器官分析軟件模塊可提供自動(dòng)化、無(wú)標(biāo)記的分析方案，用于優(yōu)化 24 或 48 孔板（Incucyte? 類器官培養(yǎng) QC 應(yīng)用）中的類器官培養(yǎng)條件，并在 96 孔板規(guī)格的分析中定量分析類器官的生長(zhǎng)和死亡（Incucyte? 類器官分析）。
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產(chǎn)品 |
|---|
| Incucyte? 類器官分析軟件模塊 （模塊可用于 Incucyte? SX5、S3、SX1 活細(xì)胞分析系統(tǒng)） |
| Incucyte? SX5 活細(xì)胞分析系統(tǒng) |
關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)
Incucyte? 類器官分析的關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)
- 類器官自動(dòng)定位和分析??-??在生理相關(guān)環(huán)境中自動(dòng)可視化和定量嵌入 Matrigel? 液滴內(nèi)的類器官。
- 類器官形成的動(dòng)力學(xué)表征?-?使用 Incucyte? 類器官分析軟件模塊獲得連續(xù)、無(wú)標(biāo)記的數(shù)據(jù)，以優(yōu)化培養(yǎng)條件。
- 確定類器官培養(yǎng)的成熟階段?-?根據(jù)綜合形態(tài)學(xué)指標(biāo)，定義類器官傳代或培養(yǎng)擴(kuò)展的理想周期。
- 提高分析效率-?采用成熟的方案和類器官實(shí)時(shí)集成分析，開(kāi)啟您的科學(xué)發(fā)現(xiàn)。
類器官自動(dòng)定位和分析
在組織培養(yǎng)箱的穩(wěn)定環(huán)境中自動(dòng)定位和定量分析類器官的分化和成熟情況，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的類器官 QC 工作流程。
圖 1. 對(duì)培養(yǎng)箱內(nèi) Matrigel? 液滴中的類器官分化和生長(zhǎng)進(jìn)行無(wú)干擾的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和定量分析。將小鼠腸道和小鼠胰腺類器官嵌入 24 孔板內(nèi)的 Matrigel? 液滴中（分別為 50% 或 100% Matrigel?），并在 6-8 天內(nèi)通過(guò) Incucyte? 成像。明場(chǎng)視頻（接種后 2 天）和明場(chǎng)區(qū)域的時(shí)程曲線分別顯示了細(xì)胞類型特異性類器官的分化、形態(tài)和生長(zhǎng)。
使用實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)測(cè)定表征類器官的形成
Incucyte? 類器官分析軟件模塊可在數(shù)周或數(shù)月內(nèi)自動(dòng)分析整個(gè) Matrigel? 液滴中類器官的大小和計(jì)數(shù)，以優(yōu)化培養(yǎng)條件。
圖 2. 使用明場(chǎng)大小的測(cè)量區(qū)分最大培養(yǎng)擴(kuò)展的適宜條件。小鼠肝臟類器官以多種接種密度嵌入 48 孔板內(nèi)的 Matrigel 液滴中 (100%)。類器官的成像（接種后 5 天）和時(shí)程曲線表明，類器官的大小和生長(zhǎng)速度與細(xì)胞數(shù)量成正比。
確定類器官培養(yǎng)的成熟階段
通過(guò)客觀評(píng)估類器官形態(tài)，深入洞察傳代或擴(kuò)展培養(yǎng)的最佳時(shí)期。
圖 3. 使用綜合形態(tài)指標(biāo)定義細(xì)胞類型特定的傳代頻率。通過(guò)出芽和管腔內(nèi)碎片積聚等成熟指標(biāo)確定腸道類器官的傳代頻率。使用 Incucyte? 的偏心率（出芽）或暗度（碎片堆積）標(biāo)準(zhǔn)對(duì)這些指標(biāo)進(jìn)行動(dòng)態(tài)定量。
提高分析效率
通過(guò)經(jīng)驗(yàn)證的方案和集成式軟件，可在 24 或 48 孔板的 Matrigel? 液滴中的形成可重現(xiàn)的類器官并可對(duì)其進(jìn)行分析。
圖 4. 經(jīng)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試的 Incucyte? Matrigel 液滴類器官培養(yǎng)方案。輕松培養(yǎng)、擴(kuò)展和維持嵌入 Matrigel 液滴中的類器官培養(yǎng)物，顯示器官特定的生理學(xué)信息。
圖 5. 向?qū)浇缑妫词钩醮问褂玫挠脩粢材軌蜉p松操作。自動(dòng)圖像采集和分析工具可為您帶來(lái)“輕松設(shè)置，自動(dòng)化處理”的體驗(yàn)。遠(yuǎn)程觀察 24 或 48 孔板中類器官的分化和生長(zhǎng)情況，實(shí)時(shí)分析和監(jiān)控實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。
