iQue? Qbeads?
生物學(xué)相關(guān)分泌蛋白和細(xì)胞因子的定量在基礎(chǔ)研究和藥物開發(fā)中至關(guān)重要,對(duì)于理解炎癥和腫瘤學(xué)中的 T 細(xì)胞活化和細(xì)胞信號(hào)級(jí)聯(lián)放大作用等都有極大幫助。在過去的十年里,有越來越多的研究開始關(guān)注炎癥過程和疾病狀況,而這些研究都涉及到細(xì)胞因子的測(cè)定和分析。這些研究的實(shí)施都需要從任何給定樣品中的多種生物分子中檢測(cè)、定量和區(qū)分特定或多種細(xì)胞因子的能力。目前,研究人員通過多種成熟的免疫分析技術(shù)來分析各種疾病模型和探索性研究領(lǐng)域中的分泌蛋白水平,如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA)、基于流式細(xì)胞術(shù)的多重分析。然而,傳統(tǒng)的蛋白分泌物測(cè)量技術(shù)存在以下弊端:
- 通量較低、費(fèi)時(shí)費(fèi)力,需要標(biāo)記、方案優(yōu)化、長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)和重復(fù)清洗等步驟
- 需要通過離心將上清液從細(xì)胞中分離出來
- 通常每個(gè)樣品只能分析一種分析物,數(shù)據(jù)變異性增加,并會(huì)消耗大量珍貴的樣品和試劑
- 需要手動(dòng)進(jìn)行復(fù)雜的數(shù)據(jù)分析以生成數(shù)據(jù)
借助豐富的 iQue? Qbeads? Plexscreen 的系列試劑,研究人員可通過不同類型的微球捕獲來分析分泌蛋白,從而實(shí)現(xiàn)生物參數(shù)的多重定量??蛻艨梢詮?50 多種分析物中選擇,定量分析人類、小鼠或大鼠的分泌蛋白,或使用 iQue? Qbead? Devscreen 試劑靈活地將自制的捕獲抗體或目標(biāo)蛋白質(zhì)粘附于微球上。iQue? Qbeads? 具有高度的可重現(xiàn)性,可顯著降低樣品用量(低至 2 μL)和獲得結(jié)果的時(shí)間,且完全無需手動(dòng)操作和清洗步驟。用戶可以將 iQue? Qbeads? 檢測(cè)與其他 iQue? 分析試劑盒結(jié)合使用,通過簡(jiǎn)化的無縫工作流程,對(duì)蛋白質(zhì)分泌、細(xì)胞活力、標(biāo)志物表達(dá)和增殖進(jìn)行高通量測(cè)量。使用集成式 iQue? ForeCyt? 軟件節(jié)省寶貴的樣品和時(shí)間,獲取實(shí)時(shí)的藥理學(xué)分析結(jié)果。貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞中分泌的細(xì)胞因子和信號(hào)分子定量從未如此簡(jiǎn)單!
關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)
高通量分析?- 在 96 或 384 孔板中快速定量分泌蛋白,促進(jìn)篩選和分析研究。
細(xì)胞因子的多重定量?-使用定制或預(yù)配置 panel 在單個(gè)樣品中分析多達(dá) 30 種分泌蛋白的濃度。
同時(shí)定量細(xì)胞因子和細(xì)胞數(shù) - 與其他 iQue? 分析試劑盒和/或抗體結(jié)合使用,聯(lián)合分析細(xì)胞功能和亞群。
最大程度地提高檢測(cè)效率?- 減少試劑成本和獲取結(jié)果的時(shí)間 - 通過簡(jiǎn)便且免洗的方案進(jìn)行分析,只需使用 2 μL 樣品。
實(shí)現(xiàn)高通量分析
在 96 或 384 孔板中快速定量分泌蛋白,完成篩選和分析研究。
圖 1.使用 384 孔板規(guī)格在最短時(shí)間內(nèi)定量細(xì)胞因子分泌物。
在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) (MLR) 分析中,單獨(dú)接種(單供體對(duì)照組)或組合接種來自多個(gè)供體(總共 8 對(duì)供體)的 PBMC(80K/孔)。用多種濃度的抗 CTLA4 檢查點(diǎn)抑制劑抗體處理細(xì)胞。HeatMap 中顯示了 384 孔檢測(cè)板上的 IFNγ分泌。針對(duì) 384 孔板的高速分析用時(shí)不超過 20 分鐘。
細(xì)胞因子的多重定量
使用定制或預(yù)配置 panel 在單個(gè)樣品中分析多達(dá) 30 種分泌蛋白的濃度。
圖 2.使用 iQue? Forecyt? 軟件系統(tǒng)快速方便地分析數(shù)據(jù)。
? 將樹突細(xì)胞與編碼的 CD4+T 細(xì)胞(T 細(xì)胞與 DC 的比率為 3:1)一同接種,并用帕博利珠單抗處理細(xì)胞,在第2天和第6天使用iQue?Qbeads?人炎癥組合試劑盒進(jìn)行分析。每個(gè)試劑盒都為所含分析物提供了預(yù)定義分析模板。(A) 用于根據(jù) Qbeads 獨(dú)特的熒光特征分離 Qbeads 的圈門模板。(B) 使用 Qbeads 在一個(gè)單孔中重復(fù)測(cè)量得到的多個(gè)炎性細(xì)胞因子的基線分泌情況。(C) 分泌蛋白質(zhì)和細(xì)胞因子的 iQue? Forecyt? HeatMap 和濃度響應(yīng)曲線有效地呈現(xiàn)出了清晰的數(shù)據(jù)趨勢(shì)。
同時(shí)定量細(xì)胞因子和細(xì)胞讀數(shù)
將 iQue? Qbeads? 與其他 iQue? 分析試劑盒和/或抗體結(jié)合使用,用于細(xì)胞功能和亞群的綜合分析。
圖 3. 分泌信號(hào)分子和細(xì)胞功能的多重定量。
??使用 Dynabeads 或 CD3-CD19 BiTE(雙特異性單鏈抗體)活化 T 細(xì)胞,除了測(cè)定同一孔內(nèi)的細(xì)胞活力(使用 iQue? 細(xì)胞膜完整性分析試劑盒)外,還使用 iQue? Qbeads? Plexscreen 捕捉并分析了細(xì)胞因子的產(chǎn)生情況。與 Dynabeads 相比,經(jīng) BiTE 處理的 T 細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子水平較低,這與靶細(xì)胞殺傷增強(qiáng)相關(guān)。(A) HeatMap 顯示了隨著 T 細(xì)胞活化劑濃度的增加 TNFα 的分泌濃度變化。分別用 Dynabeads (B) 和 BiTE (C) 活化 T 細(xì)胞后,IFNγ 分泌的濃度響應(yīng)曲線。使用 Dynabeads (D) 和 BiTE (E) 時(shí)的細(xì)胞活力。
最大程度地提高檢測(cè)效率
減少試劑成本和獲取結(jié)果的時(shí)間 - 只需使用 2 μL 即可,節(jié)省寶貴的樣品,無需清洗步驟。
圖 4. iQue? Qbeads? Plexscreen 分析試劑盒的工作流程。
(A) 使用 iQue? Qbeads? Plexscreen 測(cè)量分析物濃度的簡(jiǎn)單工作流程示意圖。(B) iQue? Qbeads? assay builder 具有靈活的分析規(guī)格,可在一個(gè)單孔中分析多達(dá) 30 種分泌蛋白的濃度。(C) 準(zhǔn)確識(shí)別 iQue? Qbeads? 和使用 iQue? Forecyt? 軟件細(xì)胞群設(shè)門表征的細(xì)胞。
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iQue? Qbeads? PlexScreen: 人分泌蛋白
細(xì)胞因子 | |||
趨化因子 | TNF | 白介素 | |
CCL2 (MCP-1) | TNF (TNFα) | IL-1α | IL-10 |
CCL3 (MIP-1α) | sCD154(sCD40 配體) | IL-1β | IL-11 |
CCL5 (RANTES) | CD178 (Fas 配體) | IL-2 | IL-12/IL-23(p40) |
CCL11 (Eotaxin) | TNFβ (LT-α/TNFSF1) | IL-3 | IL-12(p70) |
CD14 | 90563 | IL-4 | IL-13 |
CXCL9 (MIG) | IL-5 | IL-17A | |
CXCL10 (IP-10) | IL-6 | IL-17F | |
CXCL11 (I-TAC) | IL-7 | IL-21 | |
CX3CL1 | IL-8 | IFN-α | |
IL-9 | IFN-γ | ||
受體 | 粘附分子 | 生長(zhǎng)因子 | 酶 |
CD121a (IL-1 RI) | CD54 | 血管生成素 | 顆粒酶 ?A |
CD121b (IL-1 RII) | CD62E | Basic FGF | 顆粒酶 B |
TNFRI | CD62L | CSF2 (GM-CSF) | |
TNFRII | CD62P | CSF3 (G-CSF) | |
CD106 | VEGF |
iQue? Qbeads? PlexScreen: 小鼠分泌蛋白
細(xì)胞因子 | |||
趨化因子 | TNF | 白介素 | |
CCL2 (MCP-1) | TNF (TNFα) | IL-1α | IL-12/IL-23 (p40) |
CCL3 (MIP-1α) | IL-1β | IL-12(p70) | |
CCL4 (MIP-1β) | IL-2 | IL-13 | |
CCL5 (RANTES) | IL-3 | IL-17A | |
CXCL1 (KC;GROα) | IL-4 | IL-17F | |
CXCL9 (MIG) | IL-5 | IL-21 | |
IL-6 | IL-23 (p19/p40) | ||
IL-9 | IFN-γ | ||
IL-10 | |||
生長(zhǎng)因子 | 粘附分子 | ||
CSF2 (GM-CSF) | CD62E (E-選擇素) | ||
CSF3 (G-CSF) | CD62L (L-選擇素) |
iQue? Qbeads? PlexScreen: 大鼠分泌蛋白
iQue? Qbeads? 人炎癥組合試劑盒
平臺(tái):兼容 iQue? 3/iQue? Screener Plus - BR 和 VBR 配置 | ||
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現(xiàn)有規(guī)格 | 產(chǎn)品目錄號(hào) | |
1 x 384 孔 | 97097 | |
5 x 384 孔 | 97098 |